я- ВСТУПЛЕНИЕ :

Любая попытка пересадки между двумя людьми (horsjumeaux monozygotes) вызывает ответную реакцию. Это отторжение трансплантата связано с им ответ munitaire реципиента против антигенов, экспрессируемых на поверхности клеток-доноров мембран, которые отличаются от антигенов, экспрессированных клетками реципиента.

Эти антигены обозначаются как : Трансплантационные антигены или d’гистосовместимость.

Большинство этих антигенов представляют собой иммуногенные и высокополиморфные мембранные гликопротеины, кодируемые рядом генов, называемых Major Corn plex.’Histocom Patibilité (КМЗ) НУ Hum лейкоцитарного антигена (HLA) которые образуют группу MultiGene (>30 гены), многоаллельность (1 или более аллели / ген) и D’выражение codominante.

HLA антигены или HLA :
→ мембраны гликопротеинов.
→ Polymorphes : что на’происхождение реакции отторжения между несовместимыми людьми при трансплантации.
→ мишени антител и цитотоксических Т-клеток во время отторжения.

II- ГЕНЕТИЧЕСКАЯ ОРГАНИЗАЦИЯ КМЗ :

гены HLA, которые кодируют молекулы HLA расположены на коротком плече хромосомы 6 # (6p группа 21..31). Этот регион s’простирается на длину d’около 4000кб, что соответствует 1/1000 человек Геном.

Гены HA сгруппированы в 2 Основные регионы :

Область Н Класс I :

В положении теломерного, она’простирается примерно на 2000 т.п.н.. Требуется больше кукурузы 20 гены являются ключевыми генами ADT, ХА ХА В и С, которые кодируют класс цепи I молекул HA.

Класс II область HA :

В положении centromérique, она’простирается примерно на 1000 т.п.н.. Она включает в себя около 32 гены, чьи основные гены HA DR являются, HADQet HA DP, которые кодируют цепи (ген) и £ (гены B) молекулы HA класса II.

В дополнение к генов, кодирующих класс HA I и II молекулы найдены в MHC, Класс III область кто с’простирается примерно на 1000 т.п.н., по крайней мере, 30 гены, компоненты комплемента основные кодируют (С2, C4, фактор B) и золото Turn фактор некроза (ФНО ФНО и др б).

NB : только ген HA область класса I и класса II молекулы кодирует HA.

	HLA
класс	II			III	я
гены	DP	DQ	DR	C4, С2, BF, TNF,…	В	С	A
Генная продукт	HLA-DP аб	HLA-DQ аб	HLA-DR аб	Белки комплемента ФНО-α, ФНО-б,…	HLA-B,	HLA-C,	HLA-A

III- ОСОБЕННОСТИ ГЕНА HLA :

гены HLA характеризуются крайним полиморфизм, Leur кодоминантного выражение, их тесная связь и неравновесие по сцеплению.

1- полиморфизм :

гены HLA являются наиболее полиморфными генами, известными. Этот полиморфизм соответствует тому, что каждый ген polyallelic (Один ген → несколько разных аллелей в популяции).

Изменчивость является полиморфизм поддержки : С’это разница в градусах между двумя молекулами или двумя аллелями, измеренная числом d’разные аминокислоты или нуклеотиды. Разница между двумя аллелями может идти 1 в 30 остатки.

Количество полиморфных остатков и скоростей вариации в основном расположены в дополнительных клеточных доменов & alpha; 1 и & alpha; 2 молекулы HLA класса I и β1 и / или & alpha; 1 молекулы HLA класса II, (См Структура).

этот полиморфизм :

• Находится на’происхождение срабатывания’гуморальный и цитотоксический иммунный ответ у реципиента HLA, несовместимый с’пересадить. молекулы HLA являются мишенью антител и цитотоксических Т-клеток во время отторжения (молекулы HLA стали в этом случае антигенов).
• Также объясняет сложность объединения двух HLA-совместимых людей, когда’пересадка считается.

2- Выражение codominante :

Каждой особи свойственны два гаплотипа HLA l.’а д’отцовское происхождение, L’другой d’материнское происхождение.

Сумма двух гаплотипов определяется генотип (пример : Аль В7 DR3 / А23 В44 DR7).

Фенотипирование HLA - это количество молекул HLA, экспрессируемых на клеточной поверхности’индивидуальный : Al, A23, B7, B44, DR3, DR7.

Каждая аллель каждого гаплотипа экспрессируется и обнаруживается его белковый продукт.

Человек может быть гомозиготным по одной или более локусам (Ex homozygotie B44 : Аль В44 DR3 / А23 В44 DR7)

Всего Каждый человек выражает (кроме гомозиготности): 02 антиген, 02 B антигены, 02 антигены С, 02 (или 03 или 04) DR антигены ; 02 DP-антигенов и 02 DQ антигены.

3- тесно :

HLA локусов,, В, С, DR, DQ, DP различны но близко связаны с одной и той же хромосоме. Передача генов поэтому блок от родителей к детям, за исключением редких рекомбинаций (кроссинговер Entre 2 отцовская гаплотипы и / или материнская) ведущий к’появление’новый гаплотип говорит рекомбинантный.

4- неравновесия по сцеплению :

Теоретически любой аллель d’локус HLA может быть связан с n’любой аллель d’другой локус : но некоторые аллели’локус преимущественно связан с аллелями’другой локус Эта ассоциация встречается чаще, чем можно было бы предположить. Мы говорим о неравновесия по сцеплению.

Эти дисбалансы ссылки, как правило, специфичны для населения, полезные маркеры для’антропология (популяции исследования).

IV- МОЛЕКУЛ HLA I КЛАССА :

Гены HLA локусов, HLA-В и HLA-C кодируют альфа цепь молекул HLA класса I.

Структура молекул HLA класса I :

HLA, HLA-В и HLA-C имеет компактную шаровидную структуру, поэтому относятся к иммуноглобулина надсемейства.

Они состоят из 02 цепи, связанные между ним нековалентно : цепь указанной тяжелая и легкая цепь сказала, La В2- microglobuline.

Α цепь : трансмембранный гликопротеин,
ВЕЧЕРА : 44 Kd,
345 аминокислоты.
Polymorphique,
Glycosylée,

она включает в себя :
– Внеклеточный N-концевой области организовано 3 районы : a1, A'2, α3 d’о 90 аа каждый..
– Гидрофобная трансмембранная область d’о 25 аа.
-Область интрацитоплазматическая (С-конец) из 30 в 40 аа.

La В2--microglobuline : внешний белок, из 12 Kd, сделанный из 99 аа.
мономорфный, Non glycosylée. Кодируемый геном, расположенным на хромосоме 15.

– Секретируемый в избытке по отношению к цепи и может существовать в свободной форме в сыворотке.
– Необходимо для’экспрессия молекул HLA класса I : полностью внеклеточный, s’связывает нековалентно на уровне домена a3.

Трехмерная структура молекул класса I показывает, что алы и а2 домены между ними образуют антигенную пептидные связи полости.

Полость пептида : тесная взаимосвязь между структурой и функцией молекул HLA класса I :
– Он расположен между доменами α1 и α2..
– Иммуногенной пептид 8 в 10 аминокислоты удерживаются остатками’закрепление и представление молекулами HLA класса I на рецептор Т-лимфоцитов CDT8 +.

Т-клеточный рецептор распознает пептид, расположенный в полости ал и а2 и части молекулы HLA.

Класс I корецептор ; CD8 связывается с доменом а3.

V- МОЛЕКУЛ КЛАСС II :

Область II класса HLA содержит несколько генов, сгруппированных в трех основных регионах : CROSS DR, HLA-DQ и др HLA-DP.

для 03 локусов есть для каждого из’их :
– ген (DRAG, DQA и DPA) которые кодируют альфа цепь.
– Гены B (DRB, BQB и ПБО) которые кодируют & beta; цепь.

L’сборка этих двух цепей составляет молекулу HLA класса II.

Структура молекул HLA класса II :

HLA DR, DQet DP имеют одинаковые молекулы А, В и С, компактная шаровой структурой.

Это трансмембранные гликопротеины, состоящие из’сеть имеет 35 KDa и d’цепочка β из 26-29 KDa связаны нековалентно.

Каждая цепь состоит :
– Два внеклеточные домены N концевые : α1 и α2 для -цепи, β1 и β2 для β d цепи’о 90 аа каждый.
– Область трансмембранный,
– Область внутри цитоплазматический С-концевой.

Α1 и & beta; 1 домены образуют между ними полость пептида.

Иммуногенной пептид 13 в 25 аа представлен HLA класса II с рецептором CD4 + клеток.

МЫ- СОТОВОЕ распределение молекул HLA :

Распределение и модуляции молекул HLA класса I :

Молекулы HLA класса I экспрессируются на большинстве ядерных клеток’организация. Количество молекул, экспрессируемых на мембране, зависит от типа клетки и’состояние дифференцировки клетки.

Распределение и модуляции молекул HLA класса II :

L’экспрессия молекул HLA класса II ограничена определенными клетками : представляющие клетки d’антигены, а именно В-лимфоциты, моноциты / макрофаги и дендритные клетки (Клетки Лангерганса’дендритные клетки ткани эпидермиса, Клетки гребенчатой ​​ганглий). Т-клетки экспрессируют активацию после.

VII- ФУНКЦИЯ МОЛЕКУЛ HLA паслись БИОЛОГИЧЕСКИЕ) :

Основные функции MHC :

1- Выбор для каталога thvmiaue T : положительный отбор и негативный отбор тимоцитов.

2- Регуляция функций клеток NK цитотоксичность :

Некоторые молекулы HLA регулируют реакцию клеток NK (Природные Killers).

Молекулы МНС класса I регулируют клеточную цитотоксичность NK. На поверхности NK-клеток есть рецепторы.’активация, а также d-рецепторы’ингибирование цитотоксичности. Поскольку многие опухолевые клетки или клетки, инфицированные вирусами являются молекулами МНС экспрессию я уменьшил, сигнал d’активация цитотоксичности NK преобладает, что приводит к разрушению аномальных клеток.

3- антигенный пептид презентация Т-клетки :

Если MHC участвует в контроле отторжения трансплантата, первичная биологическая функция молекул МНС состоит в определении антигенных пептидов и представить их на поверхности клеток к Т-клеткам.

Источник пептидов, их внутриклеточный путь до ассоциации с молекулами МНС и тип Т-клетки, к которым они представлены варьируются в зависимости от класса HLA рассматриваемого :

– Класс I молекулы, присутствующие в CD8 + Т-клеток :

Белки из цитозола направляются в multicatalytic комплексов, называемых протеасомами, которые расщепляют генераторный пептид 8 в tthhee. Пептиды транслоцируются в эндоплазматической сети с помощью конвейерной системы.

В эндоплазматической сети, пептид связывается с альфа димер / & beta; 2-микроглобулин. Молекула HLA класса I, которая, таким образом, загрузила пептид, может затем следовать по пути’поверхностный экспорт и экспрессия клеточной мембраны через’Аппарат Гольджи, в котором происходит гликозилирование цепи (см диаграмму, страница 7).

NB : некоторые экзогенные белки, не синтезируются клеткой может быть представлен через молекулы класса I. Мы говорим о кросс-презентации (кросс презентации)

– Молекулы класса II представлены CD4 + Т-клеток :

Белки или частицы из внешней среды, фиксируется приемником или воспринимаются эндоцитоз, интернализируются в endomoses и расщепляются на пептиды.

А- и бета-цепи неосинтезированных молекул HLA класса II’ассоциаты в эндоплазматическом ретикулуме, проходить через’Аппарат Гольджи, в котором цепи α и β затем гликозилируются в компартменте молекулы HLA класса II, который сливается с эндосомным путем. (ядрышко, лизосома). На этом уровне каждой молекула класса II HLA-загрузит пептид, полученный из эндосого пути, выходит из отсека и транспортируется на поверхность (см диаграмму, страница 7).

NB : молекулы HLA класса II также обладают самостоятельной пептиды, полученной из деградации собственных белков внеклеточного среды, мембранные белки…

VIII- ИССЛЕДОВАНИЕ HLA полиморфизма (HLA типирование) :

Знание полиморфизма HLA s’разработан на основе разных методик : серологический, Клеточная и молекулярная биология.

1- Серологические методы :

Техника microlymphocytotoxicity зависит дополнение (LTC) введенный P.TERASAKI Клелланд и Mc является эталонным методом для определения антигенов HLA класса I (A, В, С) и класс II (DR, DQ)

– Principe :

С учетом опечаток клеток

+

Батарея’антитело- HLA Classe 1 Класс II или известный

+

Кролик дополнение

→

BRIGHT

Положительная реакция приводит к лизису отображается витальным красителем.

Серологические методы помогли определить : HLA специфичности, специфичности HLA-B, HLA специфичности CW, DR особенности и характеристики DQ.

2- клеточные технологии :

смешанная культура лимфоцитов или реакция смешанной культуры лимфоцитов

Клеточные технологии помогли определить 06 DP особенностей (Антигены HLA-DP не идентифицируемые серологическим метод.

3- методы молекулярной биологии :

Высокая скорость полиморфизма HLA, особенно HLA DR n’только частично распознается серологическими и клеточными методами. L’подход молекулярной биологии полиморфизма HLA модифицировал знания об этом полиморфизме.

Целевые гены HLA типирования являются те, которые кодируют полипептидную цепь на клеточной мембране, а именно :

• для класса I : HLA, HLA-B HLA-C.
• Класс II : HLA DRB, HLA DQA, HLA DQB, HLA-ДП и др HLA РОП.

После извлечения’ДНК из клеток крови. Методы молекулярной биологии объединяет шаг d’ферментативная амплификация in vitro с помощью ПЦР (полимеразной цепной реакции) HLA полиморфный локус исследования.

Идентификация полиморфизма может быть сделана с помощью различных методов, наиболее распространенных и HLA-типирование, применимы к ПЦР-SSO (Последовательность Конкретная Oligoprobe), ла PCR-SSP (Последовательность. Конкретные праймеры) и ПЦР-ПДРФ (Полиморфизма длин рестрикционных фрагментов).

IX- НОМЕНКЛАТУРА :

Для особенностей, описанных с помощью серологических методов и клеточных.

HLA + Название серии с указанием локуса принадлежит специфичности + 1 или 2 статистика.

бывший : HLA A1, HLA DR4, HLA DPI,…

Для локуса С буквой W присоединен к C, чтобы избежать путаницы с комплемента белков.

бывший : HLA Cw4.

Для аллелей, определенных молекулярной биологии

HLA + имя серии, определяющее локус, которому принадлежит l’аллель, затем звездочка + 4 статистика :

Les 2 Предварительные данные сходны в целом к ​​специфичности, полученный с помощью серологического метода, остальные две цифры соответствуют аллельного варианта.

бывший : HLA A1 s’записано HLA A * 0101 в A * 0105 (т.е. d. Цюй’там 05 аллельные варианты определены молекулярной биологии

молекулы HLA-Аль определены серологически).

Икс- НЕКОТОРЫЕ ПРИМЕНЕНИЯ HLA :

• Ассоциация или связь с некоторыми заболеваниями (пример : HLA B51 и болезнь Бехчета).
• Трансплантация’органы и трансплантация клеток и тканей (выбор донор / получатель).
• Антропология для’популяции исследования (миграции, изменение расы…).
• судебно-медицинская экспертиза (тестирование отцовства…).

A- Сборка класса HLA I и молекулы пептида загрузки :

В- Сборка молекулы HLA II класса и пептидного нагружения

Подведение итогов и сравнительная таблица :

	HLA Classe В	HLA II Classe
локус генетика	HLA, HLA-B HLA-C. знак равно> α цепь.	HLA DP, HLA DQ HLA DR. Генные => α цепь. Gene B => β цепь.
Структура	α цепь + β2 microglobuline	α цепь + β цепь
полиморфные участки	α1 и α2	α1 и β1
клеточное Expression	Практически все ядросодержащие клетки’организация.	Ячейки, представляющие’антиген : дендритные клетки. Макрофаги, Лимфоциты B.
Презентация’антиген к :	Лимфоциты CD8 + Т (цитотоксический)	Лимфоциты CD4 + Т (вспомогательный)
Первый представлен пептид	Белки, полученные в цитозоле +++ (эндогенный)	внеклеточные белки +++ (экзогенный)

Курс доктора Х. BOUAB – Факультет Константина