الدراسة في المختبر من المضادات الحيوية

0
6120

أنا- lntroduction :

والغرض من إجراء عملية المضادات هو التنبؤ حساسية من كائن حي إلى واحد أو أكثر من المضادات الحيوية في العلاجية البصري أساسا. أنها تخدم أيضا :

  • في المراقبة الوبائية المقاومة البكتيرية ;
  • في تحديد البكتيريا التي كتبها تحديد المقاومة الطبيعية.

نضع في اعتبارنا أنه في الممارسة العملية, دراسة تأثير المضادات الحيوية في المختبر، وعادة في ظل ظروف ثقافة القياسية. وهكذا, يجب تحديد الارتباطات لتولي فعالية في الجسم الحي من المضادات الحيوية، وبالتالي الى النجاح (أو الفشل) العلاج على البيولوجية في قاعدة بيانات المختبر.

II- الجراثيم :

1- تعريف :

الجراثيم يتوافق مع التباطؤ في نمو السكان البكتيرية, حتى وقف النمو. هذا لا ينطبق إلا إذا كانت البكتيريا في مرحلة النمو قبل الاتصال. خلاف ذلك انعدام التنمية قد تتوافق أيضا إلى زيادة واضحة في الكمون.

الجراثيم يمكن دراستها في وسط سائل، على سبيل المثال من خلال رصد الضوئية لنمو الكائنات الحية الدقيقة في وجود تركيزات مختلفة من المضادات الحيوية.

2- MIC = التركيز المثبط الأدنى :

المعلمة الأكثر استخداما لتقييم تأثير مضاد حيوي هو IJC. وهو يقابل الحد الأدنى للتركيز المضادات الحيوية التي تمنع نمو المرئي من 24H الحي. هكذا يستكشف CMI تأثير جراثيم فقط, (علما بأن استخدامها ليس له ما يبرره في المريض المناعة).

الارتباطات ملاحظة جيدة وظيفة بيولوجية السريرية IJC, وهو مؤشر جيد للفعالية العلاج بالمضادات الحيوية : عندما يتجاوز العلاج قيمة معينة الفشل هو المعتاد : عندما يكون أقل من نجاح قيمة أخرى غير مضمون عمليا. بين القيمتين السابقة, التنبؤ مستحيل

3- تقرير هيئة التصنيع العسكري :

وIJC ليس, لبكتيريا معينة, ثابت البيولوجي. ومن يعرف بأنه أقل تركيز من مجموعة من التخفيفات من نصف نصف المضادات الحيوية مما يؤدي إلى تثبيط أي نمو البكتيريا مرئية.

الأسلوب الذي التخفيف على التوالي في وسط صلب هو الأسلوب إشارة لحساسية البكتيريا للمضادات الحيوية. هذا التحديد يتطلب توحيد الصارم التجريبية بروتوكول (التأثير Nnoculum, حضانة, تقنية البذر, المضادات الحيوية لفحصها, قراءة, ضوابط الجودة المتوسطة الثقافة و), أي تعديل في ظروف تجريبية يجعل من الصعب تفسير.

أساليب أخرى هي التخفيفات المتعاقبة المعمول بها في الوسط السائل (تقييم نمو البكتيريا بظهور اضطراب) ; E-اختبار (شرائط مشربة مع التدرج من المضادات الحيوية).

III- حساسية مفهوم / مقاومة :

1- تعريف المقاومة :

مقاومة البكتيريا للمضادات الحيوية هي إما الطبيعية, يكتسب.

المقاومة الطبيعية للنوع أو جنس هي :

  • وهناك ميزة, لجميع سلالات من الأنواع أو جنس
  • يحملها كروموسوم تنتقل دائما إلى الأبناء : الانتقال الرأسي

حرف لتحديد النمط الظاهري البرية أو حساسية في الأنواع المكتسبة المقاومة, من جانبه :

  • اهتمامات سوى نسبة أكثر أو أقل كبيرة, متغير في الوقت المناسب
  • الناتجة عن التعديل الوراثي بواسطة الطفرات أو حيازة البلازميدات أو الترانسبوزونات, (المقاومة الكروموسومات إضافية) أفقيا انتقاله, أحيانا بين الأنواع المختلفة

يعرف الظواهر "مقاومة".

وأعرب عبر المقاومة, هن, ضمن نفس الفئة من المضادات الحيوية وترجع إلى نفس الآلية المقاومة.

2- تحديد الفئة S / L / R :

تم تحديد القيم الحرجة التي تحدد الفئات السريرية وتوفير دليل لتحديد قابلية البكتيريا للمضادات الحيوية. القيم الحرجة المحددة للتركيزات وأقطار مناطق التثبيط, فضلا عن توصيات محددة لأنواع معينة أو مجموعات من المضادات الحيوية

وقد تم اختيار ثلاث فئات السريرية لتفسير حساسية في المختبر : معقول (س), مقاوم (R) والمتوسطة (أنا).

سلالات S تصنيفها : هي تلك التي يكون احتمال نجاح علاجي قوي في حالة العلاج الشامل مع الجرعة الموصى بها

سلالات R تصنيفها: هي تلك التي يوجد احتمال كبير لفشل العلاج بغض النظر عن نوع العلاج والجرعة المستخدمة من المضادات الحيوية.

وقف تصنيفها I : هي تلك التي النجاح العلاجي لا يمكن التنبؤ بها. هذه السلالات هي مجموعة غير متجانسة تكون فيها نتائج التي تم الحصول عليها في المختبر ليست التنبؤية لنجاح العلاج.

3- إنشاء القيم الحرجة تحديد فئات السريرية :

طريقة نشر باستخدام العلاقة بين هيئة التصنيع العسكري وقطر تثبيط حول مصدر المضادات الحيوية, القراءة هي بسيطة نسبيا. للبكتيريا، ونظرا للمضادات الحيوية, تتم مقارنة بقطر قياس تثبيط لقطر منطقة :

  • < قطر حاسم أقل, كانت السلالة R سرية.
  • > ش أمر بالغ الأهمية أكبر قطرها من D, كانت السلالة S سرية.

بأقطار النقاد وD تتوافق على التوالي لارتفاع وانخفاض تركيزات الحرجة C ج.

يتم تعريف القيم التركيز وبأقطار الحرجة لكل المضادات الحيوية

4- العلاقة مع CM I :

وتعتبر العيون من تركيزات وبأقطار الحرجة :

-► الحساسة (س) : سلالات التي وMIC من المضادات الحيوية اختبار ^ هي تركيز حرج منخفضة (ج), وهو ما يعادل قطرها > قطر حرجة D

-► مقاومة (R) : وجها لوجه الذي سلالات MIC من المضادات الحيوية اختبارها، هو > ارتفاع الحرج تركيز C, المقابلة لقطر < الناقد قطر

-► من قابلية المتوسطة (أنا) : وجها لوجه الذي سلالات MIC من المضادات الحيوية اختبارها وقطر المقابلة ما بين اثنين من تركيزات الحرجة وقطر بمنطقتين.

الفئات CMI (ملغ / L) قطر (مم)
معقول CMI ≤ ج قطر ≥ D
مقاوم CMI > C قطر < د
Intermediair ج < CMI ≤ C د ≤ قطر < د

IV- مفهوم الطيف :

يرتبط كل مضاد حيوي بقائمة من الأنواع البكتيرية التي تشكل « طيف النشاط » من الجزيء. الطيف الطبيعي, أنشئت في الدراسات المبكرة قبل أي استخدام العلاجي, لا تزال مستقرة بطبيعتها لأنه لا يأخذ بعين الاعتبار نسبة البكتيريا التي اكتسبت مقاومة للمضادات الحيوية بعد الاستعمال. وهذه النسبة تزداد مع الوقت لأن استخدام ضغط يمارس المضادات الحيوية انتقائية لظهور طفرات أو سلالات تحمل عوامل المقاومة خارج الصبغي. هذا المفهوم يجب أن يكون معروفا إلى الطبيب لأنه يفسر المواقف التي تبدو متناقضة : مثلا, الطيف الطبيعي البنسلين G يتألف المكورات العنقودية الذهبية في حين حاليا 90% سلالات مقاومة من خلال إنتاج بنسليناز.

V- طرق الدراسة في المختبر :

أ- Antibiogramme :

1- برينسيبي :

L & [رسقوو]؛ اختبار الحساسية هو تحديد تركيز المثبطة الدنيا (CMI) السلالة البكتيرية وجها لوجه مختلف المضادات الحيوية.

2- التقنيات التقليدية :

طرق التخفيف

يتم تنفيذ طرق التخفيف في وسط سائل أو صلب في منتصف. وتشمل وضع اللقاح البكتيري موحدة في اتصال زيادة تركيزات المضادات الحيوية في متوالية هندسية من نسبة 2.

في الوسط السائل (الشكل 1), ل’يتم توزيع اللقاح الجرثومي في سلسلة من الأنابيب (طريقة macrodilution) أو cupules (طريقة microdilution) تحتوي على ل’مضاد حيوي. بعد الحضانة, يشار إلى MIC بواسطة الأنبوب أو الكوب الذي يحتوي على أقل تركيز من’مضاد حيوي حيث لا يوجد نمو’مرئي.

الشكل 1 : تقرير هيئة التصنيع العسكري من التخفيف في وسط سائل.

السابق : هيئة التصنيع العسكري من سلالة اختبار هو 2 جزء من الغرام / مل (الأنبوب الأول الذي لا يوجد نمو فيه’مرئي في’nowil الآن).

في وسط صلب (شخصية أبو منجل), ل’يتم دمج المضاد الحيوي في وسط أجار يسكب في أطباق بتري. وكان المصنف سطح أجار مع اللقاح من سلالات لدراسة. بعد الحضانة, يتم تحديد MIC من كل سلالة من قبل’تثبيط النمو على الوسط الذي يحتوي على أقل تركيز’مضاد حيوي. طريقة التخفيف آغار المتوسطة, نفذت مع مجموعة من تركيزات في متوالية هندسية بسبب 2 هو الطريقة المرجعية.

1bis الشكل : تقرير هيئة التصنيع العسكري التي كتبها تخفيف أجار.

السابق : هيئة التصنيع العسكري من سلالة 3 مقابل’المضادات الحيوية المدرجة في أجار هي Ipg / ml. هيئة التصنيع العسكري من سلالة 2 غير 2 جزء من الغرام / مل. قرارات هيئة التصنيع العسكري تنبع 1 و 4 تتطلب اختبار زيادة تركيزات أقوى من المضادات الحيوية.

طرق التسليم : معيار antibiogramme

الطرق المتاحة أو قابلية المعايير هي الأكثر استخداما من قبل مختبرات التشخيص.

أقراص من الورق النشاف, المضادات الحيوية مشربة لفحصها, تترسب على سطح’وسيلة أجار, تلقيح السابق مع ثقافة نقية من سلالة لدراستها. على’تطبيق الأقراص, المضادات الحيوية منتشر بشكل موحد بحيث تركيزاتها تتناسب عكسيا مع المسافة القرص. بعد الحضانة, CD الصورة’المناطق المحيطة’تثبيط دائري المقابلة لغياب ثقافة. عندما يتم تقنية موحدة جيدا, أقطار مناطق’تثبيط تعتمد فقط على حساسية البذور.

3- التقييس :

موثوقية النتائج و[رسقوو]؛ يتأثر الحساسية للمضادات الحيوية من قبل العديد من المعلمات التي يجب أن تكون خاضعة لرقابة صارمة. ويخضع توحيد وثائق من’O.M.S. واللجان الوطنية المختلفة. حسب البلدان, قد تكون هناك اختلافات التقنية ومن المهم اتباع تقنية مماثلة لتلك المستخدمة ل’إنشاء المنحنيات القياسية.

4- النتائج :

القراءة التفسيرية للو[رسقوو]؛ القابلية

القراءة التفسيرية لل’ويستند القابلية على معرفة الظواهر المقاومة. والهدف الرئيسي لتحويل نتيجة لتصنيفها « معقول » يؤدي إلى « وسيط » أو « مقاوم » بسبب خطر’فشل علاجي. القراءة التفسيرية يتطلب التحديد الصحيح للسلالة وطريقة وو[رسقوو]؛ موحدة تماما اختبار الحساسية. تسليط الضوء على الطرز الظاهرية المقاومة غير مرجحة للغاية بالنظر إلى’التعرف على سلالة يجب أن يؤدي إلى تحقق’تحديد البكتيريا, للسيطرة على نقاء اللقاح والسيطرة على تقنية’antibiogramme.

الآن, هناك أنظمة محوسبة د’المساعدة في التحقق من صحة النتائج : النظم الخبيرة التي تسمح للحصول على نتائج غير طبيعية. هذا التحقق من الصحة هو :

  • تحقق الاتساق جرثومة / القابلية
  • الكشف عن الظواهر المقاومة مستحيلة
  • كشف’غياب د’المقاومة المصاحبة
  • الاعتراف الظواهر الشاذة قد تتوافق مع أساليب مقاومة جديدة.

RQ : تعميم نتائج المضادات الحيوية التي لم يتم اختبارها’التعرف على الجرثومة ومعرفة مقاومتها الطبيعية. يعتمد هذا الاختيار أيضا على موقع’عدوى.

من بين المضادات الحيوية المحتملة’يمكن استخدامها في العلاج, لم يتم اتخاذ جميع الجزيئات في الاعتبار. في الواقع, معرفة عائلات’المضادات الحيوية وآليات المقاومة المتقاطعة لا يمكن تضمينها في’المضادات الحيوية’عدد محدود من الجزيئات الممثلة.

5- تقنية أخرى :

تقنية أجار : وE-Test®

التحديد الدقيق للCM من طريقة مرجعية من الصعب استخدامها في الممارسة اليومية. تسويق’تقنية سريعة وبسيطة, وE-Test®(AB Biodisk) يسمح تقدير المختبر غير المباشر للCM (الشكل 4).

الشكل 4 : وEtest®

ب- في الأساليب ذاتها :

1- بحث بيتا lactamases :

تعطيل انزيم المضادات الحيوية بيتا لاكتام يمكن الكشف عنها بواسطة طريقة مولد اللون :

ويستند المبدأ على’استعمال’تغير لون السيفالوسبورين بعد التحلل المائي. الأكثر استخداما هو الجزيء الذي nitrocefin, بعد العمل د’بيتا- اكتاماز, تتحول من الأصفر إلى الأحمر. ويتم تسويق أقراص مشربة nitrocefin الورق : اختبار Céfinase .

2- ابحث في مقاومة méticilino في العنقوديات :

تحت الظروف القياسية’antibiogramme, سوى جزء ضئيل من السكان يعبر عن مقاومة البنسلين M. فقط ظروف أكثر جذرية (الحضانة عند 30 درجة مئوية ; فرط المتوسط ​​المالح MH) السماح للتعبير أفضل من المقاومة. نقوم بإيداع القرص د’أوكسيسيلين على سطح الوسط. تتم قراءة 24 48H فحينئذ. A المقاومة غير متجانسة يتجلى من خلال وجود المستعمرات حجم متغير في جميع أنحاء القرص. الحضور القوي لهذه الجرثومة في بيئة المستشفى يجعل أبحاثهم أساسي.

3- بحث بيتا lactamases طيف واسع (انفجارات) :

يتم استخدام التقنية أيضا لنشرها داخل الطيف البحث بيتا اكتاماز إلى الموسعة (انفجارات).

لهذا لدينا على السطح د’أجار قرص ceftazidime (و / أو سيفوتكسيم, و / أو سيفيبيم, و / أو د’أزتريونام) و’حمض أموكسيسيلين clavulanic (لالمعوية) أو تيكارسيلين حمض clavulanic(pourle الزائفة الزنجارية)

ESBLs هي بيتا لاكتامازات وبالتالي يتم تثبيطها بواسطة’حمض clavulanic. ثم نلاحظ التآزر’العمل بين المضادات الحيوية, ودعا « الفلين الشمبانيا

هذه التقنية تجعل من الممكن التمييز بين السيفالوسبوريناز المفرط للبكتيريا د’بكتيريا تنتج ESBL في عائلة المعوية على سبيل المثال.

فل- حالة خاصة من اختبار الحساسية المضادة للميكروبات الآلي :

L’أتمتة’المضادات الحيوية’تم تطويره للتغلب على عيوب هذه التقنية اليدوية, الذي إدراك بطيء. الآن, يستخدم هذا المصطلح لتحديد الأجهزة التي تقرأ وتقرأ’تفسير الاختبارات اليدوية. وتعمل هذه الأجهزة على 2 مبادئ :

  • تحاكي الاختبارات التقليدية د’دراسة حساسية البكتيريا للمضادات الحيوية (أكثر تقنية شائعة : في التخفيف المتوسطة السائل
  • أو أنها مقارنة نمو شاهدا على تلك التي لوحظت في وجود تركيزات واحد أو أكثر من المضادات الحيوية.

أساليب دراسة نمو البكتيريا تستخدم وسائل بصرية مباشرة :

  • تحليل الصور التي تم جمعها بواسطة كاميرا
  • Turbidimètrie (OD ليتناسب تعليق لكتلة الجسيمات العالقة) ;
  • nephelometry (قياس الضوء diffracted). عموما, nephelometry ديه حساسية أعلى ولكن مجموعة أضيق الخطي أن قياس العكر.

VII- التآزر الأحداث :

استخدام مزيج من المضادات الحيوية له ما يبرره في أربع حالات :

-► توسيع نطاق النشاط في حالة التهابات جرثومية متعددة ;

-► دون تشخيص حالات الطوارئ علاج عدوى خطيرة ;

-► اختيار منع من المسوخ مقاومة خلال طويلة المدى العلاج ;

-► الحصول على تأثير متناغم.

تفاعل اثنين من المضادات الحيوية يمكن أن تنتج أربعة آثار رئيسية :

-► اللامبالاة : نشاط مضاد حيوي له أي تأثير على النشاط الآخر

-► إضافة : تأثير الجمع يساوي مجموع الآثار التي تنتجها كل من المضادات الحيوية التي اتخذت بشكل منفصل

-► التآزر : تأثير مجموعة أكبر من مجموع الآثار التي تنتجها كل من المضادات الحيوية التي اتخذت بشكل منفصل : السابق بيتا لاكتام (أو فانكومايسين) تسهيل تغلغل الأمينوغليكوزيد

-► العداء : تأثير مزيج أقل من مجموع الآثار التي تنتجها كل من المضادات الحيوية التي اتخذت بشكل منفصل : السابق جراثيم (التتراسكلين, الماكروليدات أو phenicols) يقلل من النشاط جراثيم بيتا لاكتام

VIII- استنتاج :

أهداف قابلية للتنبؤ المضادة للميكروبات حساسية من كائن حي إلى واحد أو أكثر من المضادات الحيوية من أجل أفضل تكيف المضاد الحيوي في سياق المعدية. وتأخذ هذه الدراسة في المختبر، وينبغي أن تنظر ميزات أخرى من المضادات الحيوية, على سبيل المثال الدوائية, من أجل أن تتاح لهم الفرصة القصوى من الانتعاش للمريض.

وقد تطورت تقنيات إعداد DST منذ عشرين عاما مع التقدم في أتمتة. وقد ساعد ذلك على الحد من الانتظار بغية تحسين نوعية الرعاية الوقت, ولكن أيضا لتحسين قابلية توحيد. لكن, لم تختف التقنيات القديمة, لأن التقنيات الآلية ليست مثالية : البكتيريا اللاهوائية وتنمو ببطء ينمو بشكل سيئ في ظل التقنيات في وسائل الإعلام السائلة. هذا يميل إلى إثبات أن مختبر علم الجراثيم يجب أن يكون اثنين من التقنيات لأداء DST : تلقائي ودليل, من أجل الحصول على أقصى قدر من التكامل بين هذه التقنيات.

دورة د / رمضاني حكيم – كلية قسنطينة