ವಿಧಾನಗಳು’ಸೆಲ್ ಅಧ್ಯಯನ

0
12756

ಪರಿಚಯ :

ಕೋಶವು ಎಲ್’ಜೀವಂತ ಜೀವಿಗಳ ಮೂಲಭೂತ ರಚನಾತ್ಮಕ ಮತ್ತು ಕ್ರಿಯಾತ್ಮಕ ಘಟಕ ಮತ್ತು ಅದರ ಸಣ್ಣ ಗಾತ್ರದ ಕಾರಣ, ಜೀವಕೋಶ ಜೀವವಿಜ್ಞಾನ. ಎಲ್ಲಾ ಡಿ’ಮೊದಲು, ಅಗತ್ಯ’ಉತ್ತಮ ಗುಣಮಟ್ಟದ ವಿಸ್ತರಿಸಿದ ಚಿತ್ರವನ್ನು ಪಡೆಯಿರಿ ; ಇದಕ್ಕೆ ಅಭಿವೃದ್ಧಿಯ ಅಗತ್ಯವಿದೆ’ಸೂಕ್ಷ್ಮದರ್ಶಕಗಳು ಮತ್ತು ಸೂಕ್ತ ತಂತ್ರಗಳಂತಹ ಸಾಧನಗಳು ಕಾಲಾನಂತರದಲ್ಲಿ ಪರಿಪೂರ್ಣವಾಗಿವೆ.

ಮೈಕ್ರೋಸ್ಕೋಪಿ ಎರಡು ಮುಖ್ಯ ಗುಂಪುಗಳಾಗಿ ವಿಂಗಡಿಸಲಾಗಿದೆ, ಪ್ರಾಥಮಿಕ ಕಣದ ಸ್ವರೂಪವನ್ನು ಒಳಗೊಂಡಿರುವ ವಿವಿಧ : ದೃಗ್ವಿಜ್ಞಾನ ಸೂಕ್ಷ್ಮದರ್ಶಕದ, ಸಹ ಫೋಟೋನಿಕ್ ಎಂಬ, ಏಕೆಂದರೆ’ಇದು ಫೋಟಾನ್‌ಗಳು ಮತ್ತು ಎಲೆಕ್ಟ್ರಾನ್‌ಗಳನ್ನು ಬಳಸುವ ಎಲೆಕ್ಟ್ರಾನ್‌ಗಳನ್ನು ಬಳಸುತ್ತದೆ’ವಸ್ತು.

ಫಾರ್’ಇನ್ನೂ ಉತ್ತಮವಾದ ವಿವರಗಳನ್ನು ಗಮನಿಸಿ, ನಾವು ರೆಸಲ್ಯೂಶನ್ ಹೆಚ್ಚಿಸಿಕೊಳ್ಳಬೇಕು, ಇದು ಸಾಮಾನ್ಯವಾಗಿ ಉದ್ದಕ್ಕೆ ಅನುಪಾತದಲ್ಲಿರುತ್ತದೆ d’ಅಧ್ಯಯನ ಮಾಡಿದ ರಚನೆಗಳಲ್ಲಿ ಹಸ್ತಕ್ಷೇಪ ಮಾಡಲು ಬಳಸುವ ವಿಕಿರಣ ತರಂಗ.

ತಮ್ಮ ನಿರ್ಣಯದ ಸೂಕ್ಷ್ಮದರ್ಶಕಗಳು ಎರಡು ಪ್ರಮುಖ ವಿಧಗಳಿವೆ : ದ್ಯುತಿ ಸೂಕ್ಷ್ಮ ಎಲೆಕ್ಟ್ರಾನಿಕ್ ಸೂಕ್ಷ್ಮ ಗಳು.

ದ್ಯುತಿ ಸೂಕ್ಷ್ಮ :

ದ್ಯುತಿ ಸೂಕ್ಷ್ಮ (ಬೆಳಕಿನ ಅಥವಾ ಫೋಟೋನಿಕ್) l ಅನ್ನು ಅನುಮತಿಸಿ’ಜೀವಂತ ಅಥವಾ ಸತ್ತ ಜೀವಕೋಶಗಳ ವೀಕ್ಷಣೆ, ಸ್ಥಿರ ತಯಾರಿಯ ಅತ್ಯಂತ ತೆಳುವಾದ ವಿಭಾಗಗಳ ಮೂಲಕ, ಇದು ಜೀವಕೋಶಗಳು ಅಥವಾ ಅಂಗಾಂಶಗಳ ಸಾಮಾನ್ಯ ನೋಟವನ್ನು ನೀಡುತ್ತದೆ ಮತ್ತು ಸಹ ಅನುಮತಿಸುತ್ತದೆ’ಜೀವಕೋಶಗಳ ಪರೀಕ್ಷೆ.

ದ್ಯುತಿ ಸೂಕ್ಷ್ಮ ಗೋಚರ ಬೆಳಕಿನ ಬಳಸಲು ಮತ್ತು ಬೆಳಕು ಸೂಕ್ಷ್ಮ ಪೃಥಕ್ಕರಣ ಸಾಮರ್ಥ್ಯವು ಅದರ ತಾತ್ವಿಕ ಸಿದ್ಧಾಂತವಾದ ತಲುಪುತ್ತದೆ 0.2 ಕ್ಕೆ, ವರ್ಧಿಸಿ ಜೀವಿಯು ಗರಿಷ್ಠ x1000.

ಹೇಳಿಕೆಯನ್ನು : ಸ್ಥಿತಿ ಛಾಯಾವ್ಯತ್ಯಾಸ ಮೈಕ್ರೋಸ್ಕೋಪಿ ಉದಾಹರಣೆ ಸಹಜವಾಗಿ ಸ್ಲೈಡ್ ಶೋಗಳು ಸಮಯದಲ್ಲಿ ಅಭಿವೃದ್ಧಿಪಡಿಸಲಾಗಿದೆ.

ಚಿತ್ರ 3. ಚಿತ್ರಗಳನ್ನು ಹೋಲಿಕೆ ಸಾಮಾನ್ಯ ಬೆಳಕಿನ ಸೂಕ್ಷ್ಮದರ್ಶಕ ದಿಂದ ಪಡೆದ (ಎಡ) ಮತ್ತು ಸ್ಥಿತಿ ಛಾಯಾವ್ಯತ್ಯಾಸ ಸೂಕ್ಷ್ಮದರ್ಶಕದಿಂದ (ಬಲ) ಮೆಟೀರಿಯಲ್ಸ್ ಕೃತಕವಾಗಿ ಬಣ್ಣದ ನಾಟ್ : ಮೂತ್ರಪಿಂಡಗಳ ನಾಳಿಕೆಯು ಸಸ್ತನಿ ಕಡಿತ ವ್ಯತ್ಯಸ್ತ.

ಎಲೆಕ್ಟ್ರಾನ್ ಸೂಕ್ಷ್ಮದರ್ಶಕಗಳು :

– ಎಲೆಕ್ಟ್ರಾನ್ ಸೂಕ್ಷ್ಮದರ್ಶಕಗಳು ಕಿರಣಗಳನ್ನು ಬಳಸುತ್ತವೆ’ಚಾರ್ಜ್ ಆಗುವ ಎಲೆಕ್ಟ್ರಾನ್‌ಗಳು, ಸಮೂಹ ಮತ್ತು ಅಲೆ ವರ್ತಿಸುತ್ತವೆ. ಹೆಚ್ಚು ಎಲೆಕ್ಟ್ರಾನ್‌ಗಳು ವೇಗಗೊಳ್ಳುತ್ತವೆ, ಮುಂದೆ ಉದ್ದಗಳು d’ತರಂಗ ಕಡಿಮೆಯಾಗುತ್ತದೆ ಮತ್ತು ರೆಸಲ್ಯೂಶನ್ ಹೆಚ್ಚಾಗುತ್ತದೆ. ಈ ಸೂಕ್ಷ್ಮದರ್ಶಕಗಳು ವಿದ್ಯುತ್ಕಾಂತೀಯ ಮಸೂರಗಳ ಅಳವಡಿಸಿಕೊಂಡಿವೆ. ಎಲೆಕ್ಟ್ರಾನ್ ಸೂಕ್ಷ್ಮದರ್ಶಕದ ಪರಿಹರಿಸುವಲ್ಲಿ ಶಕ್ತಿಯಾಗಿದೆ 0,2 ಎನ್ಎಮ್ ಮತ್ತು 1 000 ಆಪ್ಟಿಕಲ್ ಸೂಕ್ಷ್ಮ ಹೆಚ್ಚಿನ ಬಾರಿ, ವರ್ಧಿಸಿ ಕ್ಷ ಅತ್ಯಂತ ಸ್ಥಾನದಲ್ಲಿದ್ದಾಗ 100 000.

ಚಿತ್ರ 1. ಬೆಳಕು ಸೂಕ್ಷ್ಮ ಮತ್ತು ಎಲೆಕ್ಟ್ರಾನ್ ಸೂಕ್ಷ್ಮದರ್ಶಕದಲ್ಲಿ ಬೆಳಕಿನ ಕಿರಣಗಳು ಮತ್ತು ಎಲೆಕ್ಟ್ರಾನ್ಗಳ ಮಾರ್ಗಗಳನ್ನು ಹೋಲಿಸುವ ರೇಖಾಚಿತ್ರಗಳು.

ಹೇಳಿಕೆಯನ್ನು : ಸ್ಕ್ಯಾನಿಂಗ್ ಎಲೆಕ್ಟ್ರಾನ್ ಸೂಕ್ಷ್ಮದರ್ಶಕದ ಉದಾಹರಣೆ ಸಹಜವಾಗಿ ಸ್ಲೈಡ್ ಶೋಗಳು ಸಮಯದಲ್ಲಿ ಅಭಿವೃದ್ಧಿಪಡಿಸಲಾಗಿದೆ.

ಜೀವಕೋಶದ ಸೂಕ್ಷ್ಮ ವೀಕ್ಷಣೆ :

ಜೀವಕೋಶದ ವೀಕ್ಷಣಾ ಎರಡು ಹಂತಗಳಲ್ಲಿ ನಡೆಯುತ್ತದೆ ; ಹೊರಗೆ ಮತ್ತು ಒಳಗೆ.

ಆಂತರಿಕ ಅನುಸಾರ ಸೆಲ್ :

ಎ- ತಯಾರಿಕೆ ವಿಧಾನಗಳು ಕತ್ತರಿಸಿ :

ಕಡಿಮೆ ಎಲೆಕ್ಟ್ರಾನ್ಗಳ ವಿದ್ಯುತ್ ಹಾಯುವ ಕಾರಣ, ಗಮನಿಸಲಾದ ವಸ್ತುಗಳು ಅತ್ಯಂತ ಸೂಕ್ಷ್ಮ ಇರಬೇಕು (ಕಡಿತ 50 ಗೆ 80 ಎನ್ಎಮ್), ಇದು ತಂತ್ರಜ್ಞಾನವನ್ನು ನಿರ್ದಿಷ್ಟ ಮಾದರಿಗಳು ಅಗತ್ಯವಿದೆ.

ಯಾವಾಗ ಜೈವಿಕ ವಸ್ತುಗಳ ಘನ (ಪ್ರಾಣಿಗಳ ಅಂಗಾಂಶಗಳಲ್ಲಿ ಅಥವಾ ಸಸ್ಯ : ಫೊಯ್, ಮೆದುಳಿನ, ಮಾಂಸಖಂಡ…, ಅಥವಾ ಕಾಂಡದ, ಹಾಳೆಯ, RACINE…), ನೀವು ಮೊದಲ ತೆಳುವಾದ ಹೋಳುಗಳಾಗಿ ಮತ್ತು ಸಾಮಾನ್ಯ ಕತ್ತರಿಸುತ್ತದೆ ಮಾಡಬೇಕು, ನಂತರ ಬಣ್ಣದ ಮಾಡಲಾಗುತ್ತದೆ. ಒಂದು ಕೋಶದಲ್ಲಿ 20 ಕ್ಕೆ ವ್ಯಾಸದ, ಚಾರ್ಜ್ ಮಾಡಬಹುದು 200 ಗೆ 400 ಕೂಪ್ಗಳು ultrafines.

ಈ ಪ್ರೋಟೋಕಾಲ್ ವಿವಿಧ ಮೆಟ್ಟಿಲುಗಳ ವೀಕ್ಷಣಾ ಪ್ರಮಾಣದ ಸೂಕ್ಷ್ಮದರ್ಶಕ ಅಥವಾ ವಿದ್ಯುನ್ಮಾನ ಅಡಿಯಲ್ಲಿ ನಡೆಸಲಾಗುತ್ತದೆ ಮಟ್ಟಿಗೆ.

ಬೆಳಕಿನ ಸೂಕ್ಷ್ಮ ಎಲೆಕ್ಟ್ರಾನ್ ಮೈಕ್ರೋಸ್ಕೋಪಿ
ಗಟ್ಟಿಗೊಳಿಸುವಿಕೆ : ಆಂತರಿಕ ವಿನ್ಯಾಸವನ್ನು ಸಾಧ್ಯವಾದಷ್ಟು ಕಡಿಮೆ ಬದಲಾವಣೆ ಮಾಡುವಾಗ ಗುರಿಗಳನ್ನು ಜೀವಕೋಶಗಳನ್ನು ಕೊಲ್ಲುವ ಸಲುವಾಗಿ. ಈ ಉದ್ದೇಶಕ್ಕಾಗಿ ಹಲವಾರು ಮಿಶ್ರಣಗಳು ಬಳಸಲಾಗುತ್ತದೆ, ಅಸ್ವಾಭಾವಿಕಗೊಳಿಸಲು ಕರೆಯಲಾಗುತ್ತದೆ ವಸ್ತುಗಳನ್ನು ಹೊಂದಿರುವ ಮತ್ತು ಮೂಲಭೂತವಾಗಿ ಪ್ರೋಟೀನ್ ಹೆಪ್ಪುಗಟ್ಟುತ್ತದೆ : ಆಮ್ಲಗಳು, ಆಲ್ಕೋಹಾಲ್ಗಳು, ಆಲ್ಡಿಹೈಡ್ಗಳಂಥ, ಕೆಲವು ಲವಣಗಳು… ಈ fixers, ಹೇಳಿದರು ಗರಣೆಕಾರಿ, ವಿಶ್ಲೇಷಿಸಿದ್ದಾರೆ ಜೈವಿಕ ವಸ್ತುಗಳ ಪ್ರಕೃತಿ ಮತ್ತು ನಂತರ ಬಳಸಲಾಗುತ್ತದೆ ಬಣ್ಣ ಮಾದರಿ ಅಳವಡಿಸಬೇಕು.
ಶಾಖ, ಮದ್ಯ, ಫಾರ್ಮಾಲ್ಡಿಹೈಡ್…. glutaraldehyde, ಆಸ್ಮೋಸಿಸ್ ಆಮ್ಲ….
ನಿರ್ಜಲೀಕರಣದ : ಸೇರ್ಪಡೆ ಬಳಸಲಾಗುತ್ತದೆ ದ್ರಾವಕದ ಮಧ್ಯವರ್ತಿಯ ಮೂಲಕ ಮಾದರಿಯಿಂದ ನೀರು ತೆಗೆದು ಅದನ್ನು ಬದಲಾಯಿಸಲು ಉದ್ದೇಶಿಸಲಾಗಿದೆ ; ಇದು ಹೆಚ್ಚುತ್ತಿರುವ ಸಾಂದ್ರತೆಯ ಆಲ್ಕೋಹಾಲ್ಗಳು ರಲ್ಲಿ ಸ್ನಾನ ಒಂದು ಸರಣಿಯನ್ನು ಒಳಗೊಂಡಿರುತ್ತದೆ. ಈ ಕಾರ್ಯಾಚರಣೆಯನ್ನು ಆದ್ದರಿಂದ ಪರ್ಯಾಯ ಅಂಗಾಂಶಗಳ ವಿರೂಪಗೊಂಡು ಕಾರಣವಾಗುತ್ತದೆ ಎಂಬುದನ್ನು ಕ್ರಮೇಣ ಇರಬೇಕು. ಅಂತಿಮ ಸ್ನಾನ ಎಂಬೆಡಿಂಗ್ ಮಾಧ್ಯಮದ ಆಲ್ಕೋಹಾಲ್ / ಜೈವಿಕ ದ್ರಾವಕವನ್ನು ಮಿಶ್ರಣದಲ್ಲಿ ಕೈಗೊಳ್ಳಲಾಗುತ್ತದೆ, ಅಂತಿಮವಾಗಿ ಮಾದರಿಯನ್ನು ಬರುವಲ್ಲಿ ಆ ಪರಿಶುದ್ಧ ದ್ರಾವಕವಾಗಿರುತ್ತದೆ ಹೊಂದಿವೆ : ಎಕ್ಸಲಿನ್, ಟ್ಯಾಲ್ಯುಯಿನ್…
ಇನ್ಕ್ಲೂಷನ್ ಅಥವಾ ಕೋಟಿಂಗ್ : ಗುರಿಗಳನ್ನು ಸಂಪೂರ್ಣವಾಗಿ ಒಂದು ಗಟ್ಟಿಯಾಗುವುದು ವಸ್ತುಗಳ ಜೀವಕೋಶಗಳು ಗರ್ಭಿತ, ದಂಡ ಕಟ್ ಮತ್ತು ಸಾಮಾನ್ಯ ಅವಕಾಶ. ಈ ವಸ್ತುವಿನ, ಅಣುಗಳು ವಾಸ್ತವವಾಗಿ ಮೂಲ ನೀರಿನ ಅಣುಗಳು ಬದಲಿಗೆ, ಸಾಮಾನ್ಯವಾಗಿ ಮೇಣದ ಅಥವಾ ಎಪಾಕ್ಸಿ ಇದು ದ್ರವ 60 ° C ಮತ್ತು ಕೊಠಡಿ ತಾಪಮಾನದಲ್ಲಿ ಇರುತ್ತದೆ ; ದ್ರಾವಕಗಳಲ್ಲಿ ಕರಗುವ ಮೇಲೆ ತಿಳಿಸಿದ, ಇದು ಅಂಗಾಂಶಗಳಿಗೆ ಅತ್ಯಂತ ಸುಲಭವಾಗಿ ವ್ಯಾಪಿಸಿರುವ. ಹಲವಾರು ಸ್ನಾನ ನಂತರ 60 ° C ಮತ್ತು ರಾಳ ಕ್ಯೂರಿಂಗ್, ನಾವು ಪಡೆಯಲು ಸರಿಯಾಗಿ ಕತ್ತರಿಸಿ ಮಾಡಬಹುದಾದ ಮತ್ತು ಮಾದರಿ ಸಂಗ್ರಹ ಮಾಧ್ಯಮದಲ್ಲಿ ಸೇವೆಸಲ್ಲಿಸುತ್ತದೆ "ಬ್ಲಾಕ್".
ಪ್ಯಾರಾಫಿನ್ ಕೃತಕ ಇಪಾಕ್ಸಿ
ಕೂಪೆ : ಉದ್ದೇಶಗಳನ್ನು ಒಳಗೊಂಡ ವಸ್ತುವಿನ ತೆಳುವಾದ ಮತ್ತು ಪಾರದರ್ಶಕ ವಿಭಾಗಗಳು ಉತ್ಪಾದಿಸಲು. ಒಂದು ಸೂಕ್ಷ್ಮ ಛೇದಕ ಪ್ರಮಾಣದ ಸೂಕ್ಷ್ಮದರ್ಶಕ ಬಳಸಲಾಗುತ್ತದೆ, ಲೋಹದ ರೇಜರ್ ಒದಗಿಸಲಾಗುತ್ತದೆ, ಸರಣಿ ವಿಭಾಗಗಳು ನೀಡುವ ; ಇವುಗಳನ್ನು ಗಾಜಿನ ಸ್ಲೈಡ್‌ಗಳಲ್ಲಿ ಜೆಲಾಟಿನ್ ದ್ರಾವಣದೊಂದಿಗೆ ಅಂಟಿಸಲಾಗುತ್ತದೆ, ಒಣಗಿದ ಕ್ಸೈಲೀನ್ ಅಥವಾ ಟ್ಯಾಲ್ಯುಯಿನ್ ಜೊತೆ deparaffinized. ಹಲಗೆಯ ಉಳಿದಿರುವ ಭಾಗವನ್ನು ಮಾತ್ರ ಜೈವಿಕ ವಸ್ತುಗಳನ್ನು.
– ರಾಸ್ಸೊಯಿರ್ ಪ್ರಕಾರದ ಮೆಟಲ್ ಬ್ಲೇಡ್ ಮೈಕ್ರೊಟೋಮ್ - ನ ಕ್ರಮದಲ್ಲಿ 5 a7mm – ಗ್ಲಾಸ್ ಅಥವಾ ಡೈಮಂಡ್ ಸ್ಲೈಡ್ ಅಲ್ಟ್ರಾಮಿಕ್ರೋಟೋಮ್ – ಕ್ರಮವನ್ನು 0.1 ಕ್ಕೆ ಮತ್ತು ಕಡಿಮೆ
ಪುನರ್ಜಲೀಕರಣ : ಈ ಇಳಿಮುಖ ಪ್ರಶಸ್ತಿಗಳನ್ನು ಆಲ್ಕೋಹಾಲ್ಗಳು ಸರಣಿ ಬಳಸಬೇಕಾಗುತ್ತದೆ, ನೀರು ಪಡೆಯಲು.
ಬಣ್ಣಗಾರಿಕೆ : ಜೈವಿಕ ಮಾದರಿಯ ಭಿನ್ನವಾಗಿ ವಿವಿಧ ಪ್ರದೇಶಗಳಲ್ಲಿ ಛಾಯೆಯ ಸಕ್ರಿಯಗೊಳಿಸುತ್ತದೆ.

  • ಬೆಳಕಿನ ಸೂಕ್ಷ್ಮ ಬಳಸಲಾಗುತ್ತದೆ ಎಲ್ಲಾ ವರ್ಣಗಳು ನೀರಿನಲ್ಲಿ-ಕರಗಬಲ್ಲ ಅವರು ಮಾದರಿಯನ್ನು ಬಣ್ಣ ಮಾಡಲಾಗುತ್ತದೆ ಮತ್ತು ಬೆಳಕಿನ ಸಾಗಣೆಗೆ ಅವಕಾಶ.
  • ಎಲೆಕ್ಟ್ರಾನ್ ಮೈಕ್ರೋಸ್ಕೋಪಿ ಎಲೆಕ್ಟ್ರಾನ್ಗೆ ಮತ್ತು ಜೈವಿಕ ವಸ್ತುಗಳ ನಡುವಿನ ಅಂತರವನ್ನು ಕಡಿಮೆ ಪರಸ್ಪರ ಉಂಟಾಗುವಂತಹ ದುರ್ಬಲ ಛಾಯಾವ್ಯತ್ಯಾಸವನ್ನು ಹೆಚ್ಚಿಸಲು ಬಳಸಲಾಗುವ ಭಾರೀ ಲೋಹಗಳು ಆಗಿದೆ.
ಮೆತಿಲೀನ್ ಬ್ಲ್ಯೂ, ತಟಸ್ಥ ಕೆಂಪು… ಹೆವಿ ಮೆಟಲ್ ಲವಣಗಳು : ಪ್ರಮುಖ ಸಿಟ್ರೇಟ್…

 

ಚಿತ್ರ 2. ಸಾರಾಂಶ ಕಡಿತ ತಯಾರಿಕಾ ವಿಧಾನವಾಗಿದೆ.

ವೀಕ್ಷಣೆಯ ಟೆಕ್ನಿಕ್ಸ್ ಬಿ-ಬಗೆಗಳು ಮತ್ತು ಸೆಲ್ ಮೇಲ್ಮೈ :

ಸಣ್ಣ ಆಯಾಮಗಳೊಂದಿಗೆ ಮಾದರಿಗಳು ಮತ್ತು ವಿಷಯಗಳಿವೆ, ತುಲನಾತ್ಮಕವಾಗಿ ಸರಳ ರೂಪ (ಅಣುಗಳು, ವೈರಸ್ ಅಥವಾ ಪ್ರತ್ಯೇಕ ಜೀವಕೋಶೀಯ ಘಟಕಗಳು : ಔ ಡಿ ಅಂಗಗಳ ತುಣುಕುಗಳನ್ನು ಅಂಗಗಳ) ನಾರುಯುಕ್ತ ರಚನೆಗಳು ಸಂದರ್ಭದಲ್ಲಿ ಯಾವುದೇ ನಿರ್ದಿಷ್ಟ ಕಟ್ ಅಗತ್ಯವಿರುವ ಅತ್ಯಂತ ಸೂಕ್ಷ್ಮ ವಿವರಗಳೊಂದಿಗೆ (ಪ್ರೋಟೀನ್ protofilaments, ಫ್ಲಾಗೆಲ್ಲಮ್, ಕೆಲವು ಬಾಲದ ವೈರಸ್…). ಈ ಎಲೆಕ್ಟ್ರಾನ್ ಸೂಕ್ಷ್ಮ ಪ್ರಸರಣ ಪರಿವೀಕ್ಷಣೆ ಇದಕ್ಕೆ ಕೊರತೆ ಸಮಸ್ಯೆ ಒಡ್ಡುತ್ತದೆ, ಇದರಲ್ಲಿ ನಾವು ಈ ಎರಡು ವಿಧಾನಗಳು ಒಂದು ಬಳಸಿಕೊಂಡು ಅನ್ವಯಿಸುತ್ತದೆ :

1- ಬಣ್ಣ ನೆಗಟಿವ್ : 2- ಮೆಟಲ್ SHADE :
ಪ್ರಿನ್ಸಿಪೆ : ಒಂದು ಬೆಂಬಲ ಮೇಲೆ ಪರೀಕ್ಷಿಸಿ ವಸ್ತು ಠೇವಣಿ ಇದೆ, ನಂತರ ಹೆವಿ ಮೆಟಲ್ ಲವಣ ದ್ರಾವಣದ ಅಸೆಂಬ್ಲಿ ಮುಳುಗಿಸುವುದು, drainée.et ಜಾಡಿನ ಮೂಲೆಗಳಲ್ಲಿ ಅಥವಾ ವಸ್ತುಗಳ ಅಂಚುಗಳನ್ನು ಮೇಲೆ ಪರಿಹಾರ ಗಮನಹರಿಸುತ್ತದೆ ಉಳಿದ ಇದು. ಪ್ರಿನ್ಸಿಪೆ : ಒಂದು ಬೆಂಬಲ ಮೇಲೆ ಪರೀಕ್ಷಿಸಿ ವಸ್ತು ಠೇವಣಿ ಇದೆ, ನಂತರ ಲೋಹದ ಆವಿಯನ್ನು ವಿಧಾನಸಭಾ ಗಮನಕ್ಕೆ (ಲೋಹದ ಎಲೆಕ್ಟ್ರೋಡ್ ಶೂನ್ಯ vaporizing ಪಡೆದ) ಮತ್ತು ನೆರಳು ತಗುಲಿದ ಈ ಕೋನವು ರೂಪುಗೊಂಡ.
ಚಿತ್ರ 4. ಋಣಾತ್ಮಕ ಬಿಡಿಸುವುದು ಪ್ರಿನ್ಸಿಪಲ್ "ಡೈ" ಮತ್ತು ಒಳಚರ್ಮದ ವಾಹಕದ ಕಣಗಳು ಅಥವಾ ಕೋಶಗಳ ಸುಮಾರು ನಂತರದ ಕ್ರೋಢೀಕರಣ ಬಳಕೆಯ ದ್ರಾವಕದ ಆವಿಯಾಗುವಿಕೆ ನಂತರ, ಅದನ್ನು ಈ ಕಣಗಳು ಋಣಾತ್ಮಕ ನೋಡಲು ಸಾಧ್ಯ ಮಾಡುವ ಒಂದು ಪ್ರಭಾವಲಯ ಪರಿಣಾಮ ಪಡೆದುಕೊಳ್ಳುವ, ಎಲೆಕ್ಟ್ರಾನ್ ಮೈಕ್ರೋಸ್ಕೋಪಿ
ಚಿತ್ರ 5. ಲೋಹೀಯ ಛಾಯೆ ತತ್ತ್ವಗಳು ಅಮಾನತ್ತಿಗೆ ಕಣಗಳು ಅಥವಾ ಕೋಶಗಳನ್ನು ಹೊಂದಿರುವ ದ್ರಾವಕದ ಆವಿಯಾಗುವಿಕೆ ನಂತರ, ಅವರು ಒಂದು ಪೊರೆಯ ವಾಹಕದ ಹಾಕಲಾಗುತ್ತದೆ. ಈ ಅಡ್ಡ ಲೋಹದ ಸಿಂಪಡಿಸಿದ ಶೂನ್ಯ ನಂತರ ; ಲೋಹದ ಈ ಪಾತ್ರಗಳನ್ನು ಎಲೆಕ್ಟ್ರಾನ್ ಮೈಕ್ರೋಸ್ಕೋಪಿ ನಲ್ಲಿ "ನೆರಳು" ನ ಸ್ಥಳಿಯ ಕ್ರೋಢೀಕರಣ ಪರಿಣಾಮವನ್ನು ರಚಿಸುತ್ತದೆ.

ಬೃಹತ್ ಅಂಗಾಂಶದ ಅವಲೋಕಿಸಿದಾಗ, ಮತ್ತು ತಮ್ಮ ಆಂತರಿಕ ಉಪಕರಣಗಳು ಒಂದು ಕಟ್ ಫಲಿತಾಂಶವಲ್ಲ ಎಂದು, ಆದರೆ ಮುರಿತ ಆಫ್, ನಾವು ಫ್ರೀಜ್ ಮುರಿತ ಮತ್ತು cryodécapage ಮಾತನಾಡಲು.

3- Cryofracture ಮತ್ತು cryodécapage :

ಈ ತಂತ್ರವನ್ನು ಲೋಹದ ನೆರಳಿನಲ್ಲಿ ಕರೆಯಲಾಗುತ್ತದೆ ವಿಧಾನದ ಅಭಿವೃದ್ಧಿಗೆ ಹತ್ತು ವರ್ಷಗಳ ಹಿಂದೆ ಅಭಿವೃದ್ಧಿ ರೂಪಿಸುತ್ತದೆ, ಇದು ಪ್ರಾಥಮಿಕವಾಗಿ ಒಂದು ಸಣ್ಣ ಜೈವಿಕ ನಮೂನೆಯಲ್ಲಿ ಅನೇಕ ತೀವ್ರಗತಿಯ ಘನೀಕರಿಸುವ ಆಧರಿಸಿದೆ (ಕಡಿಮೆ 1 ಎಂಎಂ 3), ದ್ರವ ಸಾರಜನಕ ರಲ್ಲಿ (- 196 ° ಸಿ). ಶಿಷ್ಟಾಚಾರದ ನಿರ್ಣಾಯಕ ಹೆಜ್ಜೆ ಮುರಿತವಾಗಿದೆ, ಮತ್ತು ಸ್ವಿಚಿಂಗ್ ಅಲ್ಲ, ಹೆಪ್ಪುಗಟ್ಟಿದ ಸ್ಯಾಂಪಲ್, ಮತ್ತು ಬಹಳ ಕಡಿಮೆ ತಾಪಮಾನದಲ್ಲಿ ಈ. ಈ ಶೈತ್ಯೀಕರಿಸಿ ಮುರಿತ ಮಾದರಿಯ ಮೂಲಕ ಅಸಮಾನ ಮೇಲ್ಮೈ ಹೊರಹೊಮ್ಮುತ್ತದೆ, ಮತ್ತು ಆ ಮಾಡುತ್ತದೆ ಆಚರಿಸಲಾಗುತ್ತದೆ ಈ ಪ್ರದೇಶದಲ್ಲಿ ಆಗಿದೆ.

ನಂತರ ಉತ್ಪತನವಾಗುತ್ತಿರುವ ರಕ್ತಮಾದರಿಯಲ್ಲಿ ಮೇಲ್ಮೈ ಎಚ್ಚಣೆ ಕೈಗೊಳ್ಳಲಾಗುತ್ತದೆ, ನಿರ್ವಾತ ಮತ್ತು ಕಡಿಮೆ ತಾಪಮಾನದಲ್ಲಿ, ಮೇಲ್ಮೈ ಐಸ್ ತೆಳ್ಳಗಿನ ಪದರವಿರುತ್ತದೆ ; ಸ್ವಲ್ಪ ಪರಿಹಾರ ರಚನೆಗಳು ಹೆಚ್ಚುತ್ತಿರುವ ಪ್ರಭಾವವನ್ನು ಹೊಂದಿದೆ (cryodécapage).

ಇದು ಲೋಹದ shadowing ಮತ್ತು ಮಾಡುತ್ತದೆ, ಶೂನ್ಯ ಮತ್ತು ಶೀತ, ಉಬ್ಬುಶಿಲ್ಪಗಳನ್ನು ಬಲಗೊಳಿಸಲು). ಒಂದು ಏಕರೂಪತೆಯ ಚಲನಚಿತ್ರ ಮತ್ತು ನಂತರ ದಂಡ ಲೋಹದ ಮೂಲಕ ಬಲಪಡಿಸಲು ಮತ್ತು ಸೋಂಕು ಅಲ್ಲದ ಪ್ರದೇಶಗಳಲ್ಲಿ ವ್ಯಾಪ್ತಿಗೆ metallized ಮೇಲ್ಮೈ ಮೇಲೆ ಸಿಂಪಡಿಸಬಹುದಾಗಿದೆ. ನಮೂನೆ ಮುರಿತಕ್ಕೆ ಮೇಲ್ಮೈ ನಿಜವಾದ ಹೆಚ್ಚು ಕರಾರುವಕ್ಕಾದ ಅಚ್ಚೊತ್ತುವಿಕೆ ಅರಿತುಕೊಂಡ : ಪ್ರತ್ಯುತ್ತರ ; ಇದು ಟ್ರಾನ್ಸ್ಮಿಶನ್ ಎಲೆಕ್ಟ್ರಾನ್ ಸೂಕ್ಷ್ಮದರ್ಶಕದಲ್ಲಿ ಗಮನಿಸಿದ ಎಂದು. ನೋಡುವ ಮೊದಲು, ಇದು ಕರಗಿ ನೀರಾಗುವ ಮೂಲಕ ಮಾದರಿಯಿಂದ ಆಫ್ ತೆಗೆದುಕೊಳ್ಳಬೇಕಾಗುತ್ತದೆ, ಜಾಲಾಡುವಿಕೆಯ ಮತ್ತು ಅಂತಿಮವಾಗಿ ಎಲೆಕ್ಟ್ರಾನ್ ಮೈಕ್ರೋಸ್ಕೋಪಿ ಗ್ರಿಡ್ ಮೇಲೆ ನೆಲೆಗೊಳ್ಳಲು .

ಚಿತ್ರ 6 : ಫ್ರೀಜ್ ಮುರಿತ ಪ್ರೋಟೋಕಾಲ್ / cryodécapage ಸಮಯದಲ್ಲಿ ಚಿತ್ರ ನಿರ್ಮಿಸುವಿಕೆಯ ಪ್ರಿನ್ಸಿಪಲ್ (1) ಉದಾಹರಣೆಗೆ ಎರಡು proteoliposomes ಐಸ್ ಸೇರಿಸಲಾಗಿದೆ. (2) ಬ್ರೋಕನ್ ಐಸ್ ಎರಡೂ ನಿಮ್ನ ಭಾಗವನ್ನು ಬಿಡುಗಡೆ (ಎಡ), ಎರಡೂ ಪೀನ ಭಾಗವನ್ನು (ಬಲ) ಕೋಶಕಗಳು. (3) ಲೋಹೀಯ ಪ್ರತಿಕೃತಿ ಆಕಾರ ದಿಕ್ಕಿನ shadowing ಮತ್ತು ನಂತರ ಪಡೆದ (ಬಾಣದ) ಮತ್ತು ಇಂಗಾಲದ ಆವಿಯಾಗುವಿಕೆಯ. ಮೇಲ್ಭಾಗದಿಂದ ನೈಜ ಪ್ರೋಟೀನ್ ಕೆಳಬದಿಯನ್ನು ಮುದ್ರೆಯು ಮುರಿತ ಪ್ರದರ್ಶನಗಳು, ದ್ವಿಪದರದಲ್ಲಿರುವ ಸಮಾಧಿ ತಮ್ಮ ಪದವಿಯನ್ನು ಪ್ರಕಾರ. ಪ್ರಸ್ತುತ ಪ್ರಾದೇಶಿಕ ಲೋಹದ ಪ್ರತಿಕೃತಿ ಮತ್ತು "ಪೊಳ್ಳಾದ" ಅಥವಾ "ಉಬ್ಬುಗಳು", ಪ್ರಕರಣವೆಂದು.
ಚಿತ್ರ 7. ಶೈತ್ಯೀಕರಿಸಿ ಮುರಿತ ಪಡೆದ ಛಾಯಾಚಿತ್ರಗಳು (ದಿ) ಎಂಬೆಡೆಡ್ ಪ್ರೋಟೀನ್ ದ್ವಿಪದರವು ಬಳಕೆಯ ಲೈಪೋಸೋಮ್ಗಳನ್ನು ನೋಟವನ್ನು (proteoliposomes) ಮತ್ತು ಒರಟು ಮೇಲ್ಮೈ ಹೊಂದಿರುವ. (1ಬಿ) ಮಾತ್ರ ಲಿಪಿಡ್ಗಳ ಸಂಯೋಜನೆ ಗೋಚರತೆ ನಯವಾದ ಲೈಪೋಸೋಮ್ಗಳನ್ನು. (2) ಒಂದು ಜೈವಿಕ ಪೊರೆಯ ಗೋಚರತೆ (ಒಂದು Xenopus ಅಂಡಾಣು ಆಫ್ ಸೈಟೋಪ್ಲಾಸ್ಮಿಕ್ ಪೊರೆಯ ಇಲ್ಲಿ ; x75 000).

ಬಾಹ್ಯ ಅವಲೋಕನಗಳು ಸೆಲ್ ಎಲೆಕ್ಟ್ರಾನಿಕ್ ಸ್ಕೇಲ್ :

autoradioaraphie ತಂತ್ರವನ್ನು :

ಪರಿಚಯ :

ಪ್ರಕೃತಿಯಲ್ಲಿ ಕಂಡುಬರುವ ವಿವಿಧ ಅಂಶಗಳನ್ನು ಪರಮಾಣುಗಳ ಸಜಾತೀಯ ಜನಸಂಖ್ಯೆಯ ಅಲ್ಲ ; ಐಸೋಟೋಪ್ಗಳ ಮಿಶ್ರಣಗಳಂತಹ (ಇಂಗಾಲದ ಒಂದೇ ಸಂಖ್ಯೆಯ ಎಲೆಕ್ಟ್ರಾನುಗಳನ್ನು ಆದರೆ ಕೋರ್ ಬೇರೆ ಸಮೂಹ ಹೊಂದಿರುವ). ಸಾಮಾನ್ಯ ಅಂಶಗಳನ್ನು ಜೊತೆಗೆ : 1ಎಚ್ಜೆ 12ಸಿ, ದಿಎನ್, 160…, ಸ್ಥಿರ ಅಪರೂಪದ ಐಸೋಟೋಪ್ಗಳ ವಿಂಗಡಿಲ್ಪಟ್ಟಿರುತ್ತವೆ :2 ಎಚ್, 13ಸಿ, 15ಎಲ್ ಎಲ್, 1ಗಳುದಿ…, ಮತ್ತು ರೇಡಿಯೋ ಐಸೊಟೋಪ್ : 3ಎಚ್, ರಲ್ಲಿಸಿ… ನಂತರದ ಪ್ರಸ್ತುತ ವರದಿಯೊಂದನ್ನು ಪ್ರೋಟಾನ್ / ನ್ಯೂಟ್ರಾನ್ ಅಸಮತೋಲಿತ ಬೀಜಕಣಗಳು, ಮತ್ತು ಸ್ವಯಂಪ್ರೇರಿತ ಕಣಗಳು ಮರುವಿತರಣೆಗಳನ್ನು ಸ್ಥಿರ ಸ್ಥಿತಿ ಕಂಡುಬರುತ್ತದೆ ಆದ್ದರಿಂದ ಸಂಭವಿಸುತ್ತದೆ. ಈ ಆರೋಪ ಕಣಗಳು ಅಥವಾ ವಿಕಿರಣದ ಹೊರಸೂಸುವಿಕೆ ಜೊತೆಗೂಡಿರುತ್ತದೆ : ಕರ್ನಲ್ ವಿಭಜನೆ ಮಾತನಾಡುವ, ವಿಕಿರಣಕ್ಕೆ ವಿದ್ಯಮಾನವಾಗಿದೆ.

ದೇಶ ಮ್ಯಾಟರ್ ರಚಿಸಿಕೊಂಡು ಪರಮಾಣುಗಳ ರೇಡಿಯೋವಿಕಿರಣಗಳನ್ನು ಕಾರಣ ಋಣಾತ್ಮಕ ಎಲೆಕ್ಟ್ರಾನ್ಗಳು ಹೊರಸೂಸುವಿಕೆಗೆ ಮುಖ್ಯವಾಗಿ (p- ಕಣಗಳು).

ಪ್ರತಿ ವಿಕಿರಣ ಐಸೋಟೋಪ್ ಮೂರು ಮಾನದಂಡಗಳ ಹೊಂದಿದೆ :

  1. ಪ್ರಸರಣ ರೀತಿಯ.
  2. ಅವಧಿಯಲ್ಲಿ ಅಥವಾ ಅರ್ಧ ಜೀವನ, ಸಮಯ ಪರಮಾಣುಗಳ ಅವನತಿಗೊಳ್ಳುತ್ತದೆ ಅರ್ಧದಷ್ಟು ಅಗತ್ಯವಿದೆ.
  3. ವಿಸರ್ಜನ ಸರಾಸರಿ ಶಕ್ತಿ (ಮೆಗಾ ಎಲೆಕ್ಟ್ರಾನ್ ವೋಲ್ಟ್ಸ್ ವ್ಯಕ್ತಪಡಿಸಿದ, ಅಥವಾ

ಎಮ್ಇವಿಗಿಂತ).

ಜೀವಶಾಸ್ತ್ರ ಅಥವಾ ಸೆಲ್ ಶರೀರ ಬಳಸುವ ಪ್ರಮುಖ ರೇಡಿಯೋ ಐಸೊಟೋಪ್ ಇವೆ : 3ಎಚ್ – 14ಸಿ – 32ಪ – 35ಎಸ್ « 22ನಾ « 42ಕೆ – 125ಎಲ್. ಅವರು ಒಂದು ಅಥವಾ ಹೆಚ್ಚು ಪರಮಾಣುಗಳನ್ನು ವಿಕಿರಣ ಇದರಲ್ಲಿ ಅಜೈವಿಕ ಅಥವಾ ಸಾವಯವ ಅಣುಗಳು ರೂಪದಲ್ಲಿ ಬಳಸಲಾಗುತ್ತದೆ ; ರಾಸಾಯನಿಕ ಜೀವಕೋಶಗಳಿಂದ ಇತರರು ವ್ಯತ್ಯಾಸವಿರುವುದಿಲ್ಲ ಮತ್ತು ಸಂಪೂರ್ಣವಾಗಿ ಬೆರೆತು ಮಾಡಲಾಗುತ್ತದೆ (ಹೀರಲ್ಪಡುತ್ತದೆ, ಚಯಾಪಚಯಗೊಳ್ಳುತ್ತವೆ ಮತ್ತು ತಮ್ಮ ವಸ್ತು ಅಳವಡಿಸಲಾಯಿತು).

ಪ್ರಿನ್ಸಿಪೆ :

ಆಟೋ ಎಕ್ಸ್ ರೇ ತೆಗೆಯುವ ನಿಖರವಾಗಿ ಮಾದರಿಯನ್ನು ಸಮತಲದಲ್ಲಿ ಒಂದು ವಿಕಿರಣಶೀಲ ಆಣ್ವಿಕ ಜಾತಿಯ ಪತ್ತೆ ಅನುಮತಿಸುತ್ತದೆ. ಈ ವಿಧಾನವು ವಿಕಿರಣ ಸಂಯುಕ್ತಗಳು ಒಡ್ಡದ ಛಾಯಾಗ್ರಹಣದ ಮಿಶ್ರಣವಾಗಿದ್ದು ಈಕೆಯನ್ನು ತತ್ತ್ವದ ಮೇಲೆ ಆಧರಿಸಿದೆ (ಫಿಗರ್ 8). ಕಣಗಳು (3 ಹೊರಡಿಸಿದ 3ಎಚ್, ದಿ 14C ಅಥವಾ 32ಪಿ ಬ್ರೋಮೈಡ್ ಧಾನ್ಯಗಳ ಲೋಹದ ಬೆಳ್ಳಿ ಗೆ ಎಮಲ್ಷನ್ ಒಳಗೊಂಡಿರುವ ಬೆಳ್ಳಿಯ ಕಡಿಮೆ, ಬೆಳಕಿನ ರೀತಿಯಲ್ಲಿ. ಕಡಿತ ಸಂದರ್ಭದಲ್ಲಿ, ಎಮಲ್ಷನ್ ನೇರವಾಗಿ ಗಾಜಿನ ಸ್ಲೈಡ್ ತಪ್ಪದೆ ಮಾದರಿಯನ್ನು ಆವರಿಸಿದ.

ವೇರಿಯಬಲ್ ಮಾನ್ಯತೆ ಸಮಯದ ನಂತರ (ಕೆಲವು ದಿನಗಳ ಕೆಲವು ನಿಮಿಷಗಳನ್ನು), ವಿಕಿರಣಕ್ಕೆ ಪ್ರಮಾಣದ ಮತ್ತು ಐಸೊಟೋಪ್ ಸ್ವರೂಪ ಬಳಸಲಾಗುತ್ತದೆ ಅವಲಂಬಿಸಿ, ಸೂಕ್ಷ್ಮ ಚಿತ್ರ ಬಹಿರಂಗ ಮತ್ತು photoprint ಎಂದು ಪರಿಗಣಿಸಲ್ಪಡುತ್ತದೆ. obseive ರಂದು, ಎಮಲ್ಷನ್, ಕಣದ ಹೊರಸೂಸುವಿಕೆಯ ಕಟ್ಟುನಿಟ್ಟಿನ ಬೆಳ್ಳಿ ಧಾನ್ಯಗಳ ಶೇಖರಣೆ (ಲೇಬಲ್ ಜೈವಿಕ ನಮೂನೆಯಲ್ಲಿ ಮೇಲಿನ, ಇದು ಕತ್ತರಿಸಿ ವೇಳೆ). ಹೆಚ್ಚು ರೆಸಲ್ಯೂಶನ್ autoradiography ರಲ್ಲಿ, ಸೂಕ್ಷ್ಮ

ವಿದ್ಯುನ್ಮಾನ, ತಾಂತ್ರಿಕ ಅಭಿವೃದ್ಧಿ ಅಭಿವೃದ್ಧಿ ಬೆಳ್ಳಿಯ ಧಾನ್ಯಗಳ ಆಕಾರವನ್ನು ನಿರ್ಣಯಿಸುತ್ತದೆ ಬರುವಲ್ಲಿ ವಿಕಿರಣಕ್ಕೆ (ಹರಳಿನ ಅಥವಾ ರೂಪ ತಿರುವುಗಳೊ ಸಮೇತವಿದ್ದು ; ನೋಡಿ ಚಿತ್ರ 9).

ಚಿತ್ರ 8. autoradiograph ತತ್ತ್ವಗಳು

ತಂತ್ರಜ್ಞಾನ ಇಲ್ಲಿ ಬೆಳಕಿನ ಸೂಕ್ಷ್ಮ ಚಿಕಿತ್ಸೆ ವಿಭಾಗಗಳು ಅನ್ವಯಿಸಲಾಗುತ್ತದೆ.

ವಿಶ್ಲೇಷಿಸಿದ್ದಾರೆ ಜೀವಕೋಶಗಳು ಸಂಘಟಿತವಾಗಿರುವ, ಚಿಕಿತ್ಸೆಗೆ ಮುಂಚಿತವಾಗಿ, ನಿರ್ದಿಷ್ಟ ವಿಕಿರಣ ಡಿಎನ್ಎ ಪೂರ್ವಗಾಮಿ (ತೈಮಿಡಿನ್ tritiée), ಹಾಗಾಗಿ ಕೇವಲ ನ್ಯೂಕ್ಲಿಯಸ್ಗಳು ಎಮಲ್ಷನ್ ಅಭಿವೃದ್ಧಿ ನಂತರ ಗುರುತಿಸಲಾಗಿದೆ ಕಾಣಿಸಿಕೊಳ್ಳುತ್ತವೆ.

(1) ಲೇಬಲ್ ಜೀವಕೋಶಗಳು ಕಪ್ಗಳು ಗಾಜಿನ ಸ್ಲೈಡ್ ಅಂಟಿಸಲಾಗುವುದು. (2) ಡಾರ್ಕ್ ಒಂದು ಛಾಯಾಗ್ರಹಣದ ಜಿಡ್ಡಿನ ಕಾಸ್ಟಿಂಗ್.

(3) ಜೀವಕೋಶಗಳ ಗೋಚರತೆ ಎಮಲ್ಷನ್ ಅಭಿವೃದ್ಧಿ ನಂತರ ಕತ್ತರಿಸಿ.

(ಒಂದು), (ಬಿ) ಮತ್ತು (ಸಿ) : ನೋಟವನ್ನು ವಿಭಾಗೀಯ ಸಿದ್ಧತೆಗಳನ್ನು 1, 2 ಮತ್ತು 3 ; (ಡಿ) : ಕ್ಲೋಸ್ಅಪ್ ವಲಯದ (ಸಿ).

ಚಿತ್ರ 9. ಲೇಔಟ್ autoradiography ಎಲೆಕ್ಟ್ರಾನ್ ಮೈಕ್ರೋಸ್ಕೋಪಿ ಈ ವಿಭಾಗವು ಪ್ರದರ್ಶನಗಳು ಡಿಎನ್ಎ ಮೀನು spermatocytes ಎರಡು ನ್ಯೂಕ್ಲಿಯಲ್ಲಿ ಸಂಶ್ಲೇಷಣೆಯ. ಜೀವಕೋಶಗಳು ಟ್ರಟೀಕರಿಸಲ್ಪಟ್ಟ ತೈಮಿಡಿನ್ ಉಪಸ್ಥಿತಿಯಲ್ಲಿ ಕಾವುಕೊಡುತ್ತವೆಯಲ್ಲದೇ ಮಾಡಲಾಯಿತು ; ಹಣದ "ಧಾನ್ಯ" ಕ್ರೊಮಾಟಿನ್ ಕೇಂದ್ರೀಕೃತವಾಗಿರುತ್ತವೆ.

ತಾಂತ್ರಿಕ ಪ್ರತ್ಯೇಕತೆ ಜೀವಕೋಶೀಯ ಅಂಗಕಗಳ :

1- ಸೆಲ್ ವಿಭಾಗೀಕರಣ ಮತ್ತು ಭೇದಾತ್ಮಕ ಬೇರ್ಪಡಿಸುವಿಕೆಯ :

ಅಂಗಕಗಳು ವಿವಿಧ ವರ್ಗದ ಅವುಗಳ ಗಾತ್ರ ಬೇರ್ಪಡಿಸಲಾಗುತ್ತದೆ, ಆಕಾರ ಮತ್ತು
ಸಾಂದ್ರತೆಯು; ಮೊದಲ ಎರಡು ಮಾನದಂಡಗಳ ವ್ಯತ್ಯಾಸಗಳು ದೊಡ್ಡ ಮಟ್ಟದಲ್ಲಿಯೇ ಇರುತ್ತವೆ (ನ್ಯೂಕ್ಲಿಯಸ್ಗಳು ಕೈಗೆ 10 ವ್ಯಾಸದಲ್ಲಿ ಮೈಕ್ರಾನ್ಸ್ ರೈಬೋಸೋಮ್ಗಳು ಅಳೆಯಲು ಸಂದರ್ಭದಲ್ಲಿ 15- 20 ಎನ್ಎಮ್) ಸಾಂದ್ರತೆಯು ಸಂಬಂಧಿಸಿದ ಆ ಕಡಿಮೆ ಹಾಗೆಯೇ (ಆಫ್ 1,1 ಬಗ್ಗೆ ಮೈಟೊಕಾಂಡ್ರಿಯದ, lysosomes ಅಥವಾ ಪೆರೋಕ್ಸಿಸೋಮ್, ಗೆ 1,6 ರೈಬೋಸೋಮ್ಗಳಿಗೆ).

ಭೂಮಿಯ ಗುರುತ್ವ ಕ್ಷೇತ್ರದಲ್ಲಿ, ಈ ಅಂಗಕಗಳು ರಚನೆಗಳ ಸ್ವಯಂಪ್ರೇರಿತವಾಗಿ ಇವೆ
homogenate ಅಮಾನತುಗೊಳಿಸಲಾಗಿದೆ ಮತ್ತು ಪ್ರತ್ಯೇಕ ಭಿನ್ನಾಂಕಗಳಾಗಿ ಯಾವುದೇ ಪ್ರತ್ಯೇಕತೆ ಪಡೆಯುತ್ತದೆ.
ನಾವು ಕೃತಕವಾಗಿ ಸೆಂಟ್ರಿಫ್ಯೂಗೇಶನ್ ಈ ಕ್ಷೇತ್ರದಲ್ಲಿ ಮೌಲ್ಯವನ್ನು ಹೆಚ್ಚಿಸಿದರೆ, ಈ ಕಣಗಳು
ಹೆಚ್ಚಿದ ವೇಗ ಮತ್ತು ಅವುಗಳ ಗುಣಲಕ್ಷಣಗಳನ್ನು ವಿವಿಧ ಪ್ರಕಾರ ಜೊತೆ ಕೆಸರು
ಹೈಡ್ರೊಡೈನಾಮಿಕ್, homogenate ಫ್ರಾಕ್ಷನೇಟೆಡ್ ಆದ್ದರಿಂದ ಆ. ಪ್ರಾಥಮಿಕ ಎಂಡ್ಪೋಯಿಂಟ್
ಗಸಿ ಶೇಖರಣೆಯ ನಿರ್ಧರಿಸುವ ದ್ರವ್ಯರಾಶಿ, ಆದ್ದರಿಂದ ಅತ್ಯಂತ ಕಣಗಳು
ದೊಡ್ಡ ಮತ್ತು homogenate ಸಾಂದ್ರತೆಯುಳ್ಳ ರೂಪುಗೊಂಡಿದೆ ಕೆಸರು (ಅಥವಾ ಆಹಾರದ ಉಂಡೆಗಳನ್ನು) ಒಟ್ಟಾಗಿ
ಟ್ಯೂಬ್ ಅಪಕೇಂದ್ರಕವನ್ನು ಕೆಳಭಾಗದಲ್ಲಿ, ಸಣ್ಣ ಮತ್ತು ಒಳಗೊಂಡಿರುವ supernatant ದ್ರವ
ಬೆಳಕಿನ. supernatant ಮತ್ತು ಗುಳಿಗೆ elutriated ಮಾಡಲಾಗುತ್ತದೆ.

ಚಿತ್ರ 10. ಭೇದಾತ್ಮಕ ಸೆಂಟ್ರಿಫ್ಯೂಗೇಶನ್ ಪ್ರೊಟೋಕಾಲ್ ಸೆಲ್ ವಿಭಾಗೀಕರಣ ಆರಂಭಿಕ homogenate ಒಂದು ಅಂಗಾಂಶ ತುಣುಕಿನ ಪಡೆದ (1 ಗೆ 3) ಫ್ರಾಕ್ಷನೇಟೆಡ್, ಮೂಲಕ 4 ಬೇರ್ಪಡಿಸುವಿಕೆಯ ಹೆಚ್ಚು ಬಲವಾದ, ಸರಣಿ 4 ದುರ್ಬಲ ಆಗುತ್ತಿದೆ ಅಂಗಕಗಳು ಅಥವಾ ಸಮೂಹ ಕಣಗಳು ಬಳಕೆಯ ಸಂಚಯಗಳು, ಮತ್ತು ಏನೂ ಫೈನಲ್ಸ್ supernatant sedimented ಮಾಡಬಹುದು. microsomes (ಬೇಸ್ 3) ಜೀವಕೋಶದ ಕೆಲವು ಪೊರೆಯ ವ್ಯವಸ್ಥೆಗಳ ವಿಘಟನೆಯಿಂದ ಉಂಟಾಗುವ ಸಣ್ಣ ಕೋಶಕಗಳು’ಏಕರೂಪೀಕರಣ.

2- ಸಾಂದ್ರತೆಯ ಇಳುಕಲಿನ ಸಮತೋಲನದ ತಂತ್ರ :

ಅಲ್ಟ್ರಾ ಸೆಂಟ್ರಿಫ್ಯೂಜ್ ಸಾಂಪ್ರದಾಯಿಕ ಸೆಂಟ್ರಿಫ್ಯೂಜ್ ಬಹುಮಟ್ಟಿಗೆ ಅತ್ಯಾಧುನಿಕ ಯಂತ್ರಗಳಾಗಿವೆ ; ತಮ್ಮ ರೋಟಾರ್ಗಳು ಬಳಿ ಅಪ್ ಮಾಡಬಹುದು 80 000 ಆರ್ಪಿಎಮ್, ಮತ್ತು ಅವರು ಗುರುತ್ವ ಅಪ್ ಜಾಗ ಒದಗಿಸಲು 500 000 ಬಾರಿ ಭೂಮಿಯ ಗುರುತ್ವ.

ಈ ತಂತ್ರವನ್ನು ಬಳಕೆಗಳು, ಅಪಕೇಂದ್ರಕವನ್ನು ಟ್ಯೂಬ್, ಅವರ ಸಾಂದ್ರತೆಯ ಸಂಯುಕ್ತದ ಸಾಂದ್ರೀಕರಣ ಒಂದು ನಿರಂತರ ಬದಲಾವಣೆಯು ಮೇಲಿನ ಕೆಳಗೆ ನಿಯಮಿತವಾಗಿ ಕಡಿಮೆಯಾಗುತ್ತದೆ. ಗ್ರೇಡಿಯಂಟ್ ರಚಿಸಿಕೊಂಡು ಪರಿಹಾರ ಸುಕ್ರೋಸ್ ಆಧರಿಸಿದೆ (ನಿರ್ವಹಿತ ಗ್ರೇಡಿಯಂಟ್), ಅಥವಾ CsCl (ಗ್ರೇಡಿಯಂಟ್ autoformé) ; ಮತ್ತು ಮಾದರಿ ಪರೀಕ್ಷೆಗಳನ್ನು, ದ್ರವದ ಮೇಲ್ಮೈ ಮೇಲೆ ಸಂಗ್ರಹವಾಗುತ್ತದೆ.

ತತ್ವ, ಕಣಗಳು ಅಥವಾ ಆಣ್ವಿಕ ಜಾತಿಯ ಏಕಾಂಗಿಯಾಗಿ ಸಾಂದ್ರತೆಯ ಆಧಾರದ ಮೇಲೆ ಬೇರ್ಪಟ್ಟಿರುವುದಾಗಿ. ಬೇರ್ಪಡಿಸುವಿಕೆಯ ಸಮಯದಲ್ಲಿ, ಈ ಕೆಸರು ತನಕ’ದ್ರವವು ನಿಖರವಾಗಿ ಅವುಗಳ ಸಾಂದ್ರತೆಯನ್ನು ಹೊಂದಿರುವ ಗ್ರೇಡಿಯಂಟ್ ಮಟ್ಟವನ್ನು ತಲುಪಲು, ಮತ್ತು ಒಂದು ಬ್ಯಾಂಡ್ ನ್ನು ರಚಿಸುವಂತೆ. ಸಾಧಿಸಿದರು, ಅವರು ಸಮತೋಲನದ ಈ ನಿಲುವಿನಿಂದ ಚಲಿಸುವುದಿಲ್ಲ, ಏನೇ ಬೇರ್ಪಡಿಸುವಿಕೆಯ ಅವಧಿಯನ್ನು (ನೋಡಿ ಚಿತ್ರ 10). ಕೊಯ್ಲು ಉಪಕರಣಗಳ ಟ್ಯೂಬ್ಗಳ ಸರಣಿಯಲ್ಲಿ ಟ್ಯೂಬ್ ಕೆಳಗೆ ಚುಚ್ಚುವುದು ಮತ್ತು ಹನಿಹನಿಯಾಗಿರುವ ಗ್ರೇಡಿಯಂಟ್ ಚೇತರಿಸಿಕೊಂಡ ಮಾಡಲಾಗುತ್ತದೆ.

ವಿಶ್ಲೇಷಣಾತ್ಮಕ ಬೇರ್ಪಡಿಸುವಿಕೆಯ ಪ್ರೋಟೀನ್ ಅಥವಾ ನ್ಯೂಕ್ಲಿಯಿಕ್ ಆಮ್ಲದ ಈ ವಿಧಾನಗಳು, ವರ್ಷಗಳ ಬಳಕೆಯಾಗಿರುವುದನ್ನು 60-70, DNA ಕಣಗಳು ಪ್ರತ್ಯೇಕತೆಯ ಶೋಷಣೆ ಮಾಡುತ್ತಿರುವುದು. ದ್ರಾವಣದಲ್ಲಿ, ಅವರು ತಮ್ಮ ಸಂಯೋಜನೆಯ ಕ್ರಿಯೆಯಾಗಿದೆ ಒಂದು ಸಾಂದ್ರತೆಯುಳ್ಳ

ಬೇಸ್ ; ಆದಾಗ್ಯೂ ಅವಲೋಕಿತ ಸಾಂದ್ರತೆಯು ವ್ಯತ್ಯಾಸಗಳು ಸಣ್ಣ ಇವೆ, ಅವರು CsCl ಗ್ರೇಡಿಯಂಟ್ ವ್ಯತ್ಯಾಸದ ಮಾಡಬಹುದು. CsCl ಡಿಎನ್ಎ ಪರಿಹಾರದ ಬೇರ್ಪಡಿಸುವಿಕೆಯ ನಂತರ, ತಮ್ಮ ತೇಲುವ ಸಾಂದ್ರತೆಯಿಂದ DNA ಕಣಗಳು ವಿಭಿನ್ನ ಸಂಖ್ಯೆಯು ಇವೆ ಹೆಚ್ಚು ಸ್ಥಿರವಾದ ತಂಡಗಳಲ್ಲಿ ಟ್ಯೂಬಿನ ಜೊತೆಗೆ ಪಡೆಯಲಾಗುತ್ತದೆ, ಅವರ ಗಾತ್ರದ (ಪ್ರತ್ಯೇಕತೆಯ ಗಣನೆಗೆ ತೆಗೆದುಕೊಳ್ಳಲಾಗುತ್ತದೆ ಹೊಂದದೇ). ಈ ತಂತ್ರವನ್ನು, ಪ್ರತ್ಯೇಕ ಡಿಎನ್ಎ ಹೊಂದಿರುವ ಮಾಡಬಹುದು ಸಾಂದ್ರತೆಯ ವ್ಯತ್ಯಾಸಗಳು ಭಾರೀ ಐಸೊಟೋಪ್ ಇರುವಿಕೆಯ ಕಾರಣ (ಬದಲಿಗೆ ಸಾಮಾನ್ಯ 14N ಆಫ್ DNA ಅನ್ನು ಹೊಂದಿರುವ ಉದಾ 15N).

ಚಿತ್ರ 11. ಬೇರ್ಪಡಿಸುವಿಕೆಯ ಸಾಂದ್ರತೆಯ ಇಳುಕಲಿನ ಸಮತೋಲನ (autoformé ಗ್ರೇಡಿಯಂಟ್ CsCl) ಸ್ಯಾಂಪಲ್ (ಸಾಮಾನ್ಯವಾಗಿ, ನ್ಯೂಕ್ಲಿಯಿಕ್ ಆಮ್ಲಗಳು) ಆರಂಭದಲ್ಲಿ ಎಂಬುದನ್ನು ಸ್ಥಾಪಿಸುತ್ತದೆ ಇದರಲ್ಲಿ CsCl ದ್ರಾವಣದಲ್ಲಿ ಕರಗಿಸಲಾಗುತ್ತದೆ, ಬೇರ್ಪಡಿಸುವಿಕೆಯ ಸಮಯದಲ್ಲಿ, ನಿರಂತರ ಗ್ರೇಡಿಯಂಟ್ ಏಕಾಗ್ರತೆ ಮತ್ತು ಸಾಂದ್ರತೆ. ಅಣುಗಳು ತಮ್ಮ ಸಾಂದ್ರತೆಯ ಕೇವಲ ಪ್ರಕಾರ ಬ್ಯಾಂಡ್ ಪ್ರತ್ಯೇಕಿಸಿ ಸಮತೋಲನವಾಗಿದ್ದರೆ ಉಳಿಯುತ್ತದೆ.

ಡಿಆರ್ AOUATI Amel ಸಮಯದಲ್ಲಿ – ಕಾನ್ಸ್ಟಂಟೈನ್ ಫ್ಯಾಕಲ್ಟಿ