копирование

0
10044

я- Вступление :

Во время клеточного цикла, Возражение содержимое ячейки, а затем делится на две дачу :

  • Новая организация в одноклеточных существ
  • Maintien de lintégrité de lorganisme chez les êtres multicellulaires (рост, возобновление утраченных клеток путем естественной или запрограммированной смерти (апоптоз)).

Дублирование Р ДНК приводит к образованию две идентичные дочерние молекулы друг с другом и родительской молекулы.

Точный механизм этого дублирования называется « Réplication de l’ADN »

II- основные механизмы репликации :

– Эти механизмы сходны у прокариот и eucaiyotes.

  • La réplication se fait dans le sens 5′ знак равно> 3′, комплементарно, selon les règles dappariement des bases : А = Т / С = С.
  • Это антипараллельная моды (le brin matrice complémentaire est copié dans le sens 3′ знак равно> 5′).

Репликация является полу-консервативной :

Исходное соединение дает одну из своих нитей с каждой молекулой дочери, который дополняется вновь синтезированной цепи.

Мезельсон и уравновешенный Опыт 1958 :

допущения :

Опыт Месельсона и сам Шталь :

Для того, чтобы подчеркнуть полу характер- conservatif de la répli cation de lADN des bactéries cultivées pendant plusieurs générations dans un milieu contenant des molécules azotées 14N пересевает на среду, содержащую азотистые молекулы 14N. Фракции собирают через регулярные промежутки времени. L’ADN est extrait, помещают в раствор хлорида цезия и центрифугировали 24. Положение ДНК определяется путем измерения оптической плотности запредельного.

– при Т = Q : одна полоса, соответствующая ДНК-конструкции 15N

– После двух поколений в среде, содержащей l4N : появление’une bande ayant une densité intermédiaire entre celle du DNA lourd1 *Н, и что световой ДНК l4N (гибридная ДНК), ce qui signifie que les molécules de DNA sont formées dunbnn lourd original et dunbnn léger néo synthétisé.

– После трех поколений в среде, содержащей l4N : Появление двух полос, соответствующий гибрид (тяжелый, свет), L’autre correspondant aux molécules formées de deux bnn légers.

■ Начнется репликации ДНК в одном или нескольких сайтах (s) называемый (s)ongine(s) копирование (ИЛИ) затем s’étend sous la forme de bulle (s) копирование. Chaque bulle comporte deux fourches de réplication qui s’éloignent l’один из других. Есть, таким образом, две системы репликации, которые развиваются в противоположных направлениях. Репликация называется двунаправленной

NB :
Существует только одна репликация Онгин в прокариот, в то время как существует несколько эукариотических

Репликация полунепрерывном :

La synthèse du nouveau bnn dADN se fait toujours dans le sens 5’ vers 3’:

– BNN чтение в направлении репликативной вилки приводит к непрерывной цепи (немного рано или продвинутый)

– BNN чтения в направлении, противоположном вилки приводит к разрывной нити (поздно, или вторичный нить) синтезируется в виде небольших фрагментов.

Каждая вилка репликации, таким образом, асимметричная

■ Несколько ферментов необходимы для репликации (хеликаза, праймаза, ДНК-полимераза … )

III- Репликация в прокариот (Е. палочка) :

A- Различные белки, участвующие :

  • ДНК-белок А (фактор инициации репликации): связывается с начала репликации и репликации позволяет инициации
  • геликаз (ДНК или В) : разместить двойную спираль, нарушая настоящую водородные связи между азотистыми основаниями двух цепей ДНК P, с потреблением АТФ.
  • Белок SSB (залить одноцепочечный связывающий белок) : имеет высокое сродство к одноцепочечной ДНК Y и предотвращает его сокращатьс при миграции репликативных вилков.
  • La праймаза : является ДНК зависимой РНК-полимераза, которая синтезирует праймер (первое яйцо), РНК-праймеры состоят из нуклеотидов lOaine.


■ топоизомеразы : Уменьшение значительно намотки скорости ДНК. они 2 типы :

– Топоизомеразы типа I де
Привязка к ДНК → разрезу 1 → одна последовательность прядь репарации ДНК →

– Тип топоизомеразы II пересекаться 2 пряди

Latopo-isomérase de type II d’E-Coli s’appelle lADN-gyrase.

  • Les ADN лигазы: катализирует образование фосфодиэфирных из друзей его, но не в состоянии двигаться нуклеотиды. Она поддерживает связь Оказаков фрагментов
  • Белок Тус (токсикомании Terminus): reconnaitle сайт терминации и завершается вывод катиона
  • Les ADN полимераз

– Фермент катализирует образование фосфодиэфирной св зи между свободной 3'-ОН группой последнего нуклеотида за растущей цепи, и 5 «фосфатной группы из нуклеотида, которые будут включены: выбор нуклеотида интегрировать уважение спаривания правил базы с матричной цепью (В паре с Т и G с С в паре).

L’ADN polymérase a besoin des composés suivant pour synthétiser une chaîne d’ADN :

Les quatre désoxyribonucléosides 5′-трифосфат (дАТФ, дГТФ, дТТФ, дЦТФ)

– праймер (грунтовка) в качестве акцептора dNMP включены в новую прядь.

Une matrice dADN simple brin.

– Mg 2+.

на Е. палочка существует 3 ДНК-полимераза

* ADN-полимераза I A 3 функции :

  • Une fonction de polymérisation 5′ знак равно> 3′ pour le remplacement des amorces dARN par un brin dADN et le remplissage des lacunes au cours de la réparation de l’ADN.
  • Une fonction exonucléasique 5’знак равно> 3’qui va éliminer les amorces d’ARN
  • Une fonction exonucléasique 3’знак равно> 5′ устранит дурные спаренные нуклеотиды и прогресс в замене их правильного нуклеотида. Это самокорректирующаяся активность снижает частоту ошибок.

L’ADN polymérase I dépourvue de la fonction exonucléasique 5’знак равно> 3Называется фрагмент Кленова

* ДНК-полимераза II : impliquées essentiellement dans la réparation de lADN endommagé.

* ДНК-полимеразы III имеет 2 функции :

  • Une fonction polymérase daddition de dNMP à lextrémité 3’OH dune chaîne nucléotidique. С’est cette enzyme qui fonctionne aux fourches de réplication, является répllcase
  • Une fonction exonucléase 3’знак равно>5′ как и для ДНК-полимеразы I

В- Этапы репликации :

Репликация происходит в три этапа :

  • инициирование
  • относительное удлинение
  • прекращение

1- инициация репликации :

  • Запускаются репликации в точную и уникальную области бактериальной хромосомы круговой называется Ori C источник репликации
  • Ori = последовательности 300 Вр приблизительно сформирована из повторяющихся последовательностей. В частности признаны инициирующих белков (DnaA)

  • Открытие двойной спирали решений появляются проекты 2 вилки репликации
  • Крепление ДНК белка B (хеликаза).
  • образуя две вилки репликации, которые движутся в противоположных направлениях друг от друга на хромосоме.
  • Прикрепление SSBs (Однонитевой-связывающий белок) на одного нити ДНК, чтобы предотвратить их повторное объединение.
  • Формирование праймосомы на каждую вилку после добавления Днао G = РНК-зависимой ДНК-полимеразы ^ праймаза) предварительно инициация комплекс (днк, DnaB, ОБП)
  • Синтез РНК праймеров (грунтовка) тридцать пара нуклеотидов в длину.

2- удлинение :

– Репликативная вилка перемещается вдоль матричной нити, которая постепенно денатурировала геликаз и сын нитей синтезируется репликазы (ДНК-полимераза Ht)

– Репликативной вилки перемещается в 5'-3 «на одной нити и 3'-5» с другой

– ДНК-полимеразы, будет включать в себя нуклеотид на свободный конец 3'-ОН (синтез в направлении 54-3»)

На ведущей нити :

  • Синтез происходит непрерывно путем удлинения праймера в 5'-3 «в качестве родительского дуплексной место.
  • SSB белки приводятся в движение при постепенно матричной нити

На отстающей нити :

– Одноцепочечной ДНК-последовательность должна подвергаться

– Сегмент синтезируется в обратном направлении (по отношению к движению вилки). Ряд этих фрагментов (фрагменты d'Okasaki) из 1000 в 2000 Pb синтезируется друг от 5 «к 3» (синтез прерывистыми).

– Затем они соединяются друг с другом, чтобы привести к замедленной интактной цепи.

– Шаблон нить прерывистой нити должна быть намотана, чтобы ДНК-полимеразу для репликации и двигаться в том же направлении, что и вилка.

На ведущей нити :

– 1 одно событие инициации в начале координат

На отстающей нити :

– Серия вводных событий (1 вол фрагмент d'Okasaki) каждая инициирована праймера

  • Снятие и замена праймеров РНК с помощью ДНК-полимеразы I.
  • Фрагменты ДНК, образованные связаны с помощью ДНК-лигазы

3- прекращение :

  • Прекращение происходит на встрече двух вилок.
  • Это делается в последовательности ТЕР, расположенной напротив начала репликации, признанного белка Тус, ЕП-Ter сложных блоков вилки, прекращение репликации
  • При репликации круговой хромосомы завершена, les 2 молекулы, полученные соединены вместе, как звенья цепи (concaténées).
  • Разделение и лигирование осуществляется путем топоизомеразы IV (топоизомеразы-де-типа 2)


IV- Различия между эукариотической и прокариотической :

эукариоты прокариоты
источник репликации множественный уникальный
Признание начала репликации Т-антиген днк
ДНК двойного разделение пряди одноцепочечной ДНК (хеликаза деятельность) Т-антиген ДНК 6
Protéines stabilisatrices de lADN simple brin RP-A (Репликация белок А) ОБП
РНК праймер да
– синтезируют с помощью полимеразной альфа, с последующим альфа и дельта или эпсилон
– понижена РНКазы H -1 ET FEN 1
– Дельта заменен Pol
да
– синтезированы праймаза (Днк G)
– ДНК с последующим пол- III
– деградировавший, remplacée par l’ADN Pol I
ДНК-полимераза альфа :
– полимеразной
– праймаза
– кивать головой’activité exonucléasique 3′->5′
дельта :
activité exonucléasique 3′- >5′
– нет праймаза
эпсилон :
activité exonucléasique 3′- >5′
– нет праймаза
бета :
-répare les courts fragments d’ADN
гамма :
réplique l’ADN митохондриальный
activité exonucléasique 3′- >5»
ADN Pol III :
– полимеразной
activité exonucléasique 3′- >5′
ADN Pol I :
-activité exonucléasique 5′- >3»
– полимеразной
activité exonucléasique 3′- >5«эти 2 Прошедшие мероприятия формируют Кленова
Fragments dOkazaki 300 Pb 1000 в 2000 Pb
ADN лигазы я, I II III ADN лигазы

V- Репликация в эукариот :

Репликации ДНК у эукариот происходит во время фазы S клеточного цикла.

A- инициирование :

– Репликация начинается у истоков репликации. Т-антиген признает этот сайт инициации, оно фиксируется и вызывает открытие двойной спирали ДНК ее геликазная активность ; В ОФ-белок связывается с ДНК областей одноцепочечной, чтобы предотвратить их переподключение.

– L'ДНК-полимеразы α (Pol α) синтезировали РНК-ДНК-праймера каждой непрерывной нити и каждая прядь партии, через его праймаза деятельности, а затем ДНК-фрагмент 20 в 30 нуклеотиды благодаря ДНК-полимеразной активности.

В- относительное удлинение :

– Белок РЧ-С (Репликация фактор C) распознает шаблон-праймер комплекс и рекрутирует белок PCNA (Пролиферативные ядерный антиген) qui provoque le remplacement de l’ADN polymérase a par l’ADN polymérase δ ou l’ADN polymérase ε, последние показан синтез Т, как функции антигена геликазов, как непрерывно и, что топоизомеразы I расслабляет напряжение до репликативной вилки.

  • Брим продолжал восток synthétisé без перерыва с помощью ДНК-полимеразы б или ДНК-полимеразы е (ДНК Pol δ раПтр également а ля репарационный де ADN.
  • Lorsque сюр-ле Брим ПРЕКРАЩАЕМАЯ ДНК-полимеразы δ (вы epsi;) подходы праймер РНК-ДНК, синтезированную ранее, последний удаляется РНКазой H1 (эндонуклеазы, что отсоединяет последовательность рибонуклеотидов исключением того, что связано с первым дезоксинуклеотид, который удаляется с помощью экзонуклеазной FEN-1).

– ДНК-полимераза δ в Engage синтезированной ей фрагмент Okasaki «Bouche есть» ухо от amorce

– ДНК-лигазы я лигирования, наконец, 5'-P последовательности праймера из фрагмента Оказаки вверх по течению к 3'-ОН конец фрагмента Оказаки вниз по течению и так далее.

С- прекращение :

– Когда синтез 2 копии завершается, топоизомеразы 11 décatène 2 хромосомы.

МЫ- La réplication de l’ADN mitochondrial :

la réplication de lADN mitochondrial circulaire n’est pas limitée à la phase S du cycle cellulaire.
Он использует два источника репликации и включает в себя промежуточную структуру 3 пряди
ДНК-полимераза отвечает за репликацию Gamma LADN митохондриальной которого
Репликация не зависит от Т ядерной ДНК.

la réplication de lADN mitochondriale est contrôlée par des gènes nucléaires et fait intervenir de
Многие белковые факторы.

ссылки

  1. Christian Moussard. Биохимия и молекулярная биология .de Бека 2го печать 2011, ISBN :978-2- 8041-6229-0.
  2. Neddjma Ameziane ,Марк Богард,Джером Lamoril. Принцип молекулярной биологии в клинической биологии .Elsevier p50-60.ISBN 2-84299-685-2.
  3. Джек J.Pasternak. молекулярно-генетический humaine.de Boeck PL02-л 15.ISBN 2-7445-0147-6.
  4. интернет

Курс доктора С.. Ханначи – Факультет Константина